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藤黄微球菌/腾黄八叠球菌操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,藤黄微球菌/腾黄八叠球菌此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:藤黄微球菌/腾黄八叠球菌取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 藤黄微球菌/腾黄八叠球菌 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。藤黄微球菌/腾黄八叠球菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY0900 人结肠癌细胞,RKO细胞
XY0901 人结肠癌细胞,Ls-174-T细胞
XY0902 人结肠癌细胞,LS174T细胞
XY0903 人结肠癌细胞,LoVo细胞
XY0904 人结肠癌细胞,LO2细胞
XY0905 人结肠癌细胞,Human sw620细胞
XY0906 人结肠癌细胞,Human sw480细胞
XY0907 人结肠癌细胞,Human HCT-8细胞
XY0908 人结肠癌细胞,HT-29细胞
XY0909 人结肠癌细胞,HRT-S1细胞
XY0910 人结肠癌细胞,HCT8细胞
XY0911 人结肠癌细胞,HCT116细胞
XY0912 人结肠癌细胞,CW-2细胞
XY0913 人结肠癌细胞,CRL-2780细胞
XY0914 人结肠癌细胞,Colo320DM细胞
XY0915 人结肠癌细胞,COLO205细胞
XY0916 人结肠癌细胞,COLO 320HSR细胞
XY0917 人结肠癌细胞,COLO 205细胞,
XY0918 人结肠癌细胞,CACO-2细胞
XY0919 人结肠癌细 SW1116细胞,
XY0920 人胶质母细胞瘤细胞,A172细胞,
XY0921 人胶质母细胞瘤 T98G细胞
XY0922 人胶质瘤细胞,U251细胞
XY0923 人胶质瘤细胞,TJ905细胞
XY0924 人胶质瘤细胞,SKMG4细胞,
XY0925 人胶质瘤细胞,SKMG1细胞
XY0926 人胶质瘤细胞,SHG-44细胞
XY0927 人间皮瘤细胞,NCI-H2452 [H2452]细胞
XY0928 人甲状腺髓样癌细胞,TT细胞
XY0929 人甲状腺鳞癌细胞,SW579细胞,
XY0930 人甲状腺鳞癌细胞,SW579 [SW 579; SW-579]细胞
XY0931 人甲状腺磷癌细胞,SW579细胞
XY0932 人甲状腺导管瘤细胞,TT细胞
XY0933 人甲状腺癌细胞,SW579细胞