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脆弱拟杆菌操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,脆弱拟杆菌此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:脆弱拟杆菌取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 脆弱拟杆菌 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。脆弱拟杆菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY1229 人B淋巴细胞,Ramos(RA1细胞
XY1230 人B淋巴瘤细胞,Farage细胞
XY1231 人Burkitts淋巴瘤细胞系 CA46细胞
XY1232 人Burkitt's淋巴瘤细胞,Raji细胞
XY1233 人Burkitt's淋巴瘤细胞,Daudi细胞,
XY1234 人Burkitt`s淋巴瘤细胞,NAMALWA细胞
XY1235 人B 淋巴母细胞,HMy2.CIR细胞
XY1236 人APP基因转染CHO细胞株 7WD10细胞
XY1237 人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293) APP-PS1细胞
XY1238 人APP-PS1(M146L)双基因转染CHO细胞株 7WML6.0细胞
XY1239 人APP-PS1(C410Y)双基因转染细胞株 7WCY1.0细胞
XY1240 热带念珠菌
XY1241 热带假丝酵母
XY1242 缺陷短波单胞菌
XY1243 球型芽孢杆菌
XY1244 球毛壳霉
XY1245 清酒酵母
XY1246 青春双歧杆菌
XY1247 浅灰链霉菌杭州变种
XY1248 前列腺癌细胞,RM-1细胞
XY1249 前列腺癌细胞,PC-3细胞
XY1250 前列腺癌细胞,LncaP细胞
XY1251 前列腺癌细胞,Lncap细胞
XY1252 前列腺癌细胞,DU145细胞
XY1253 前列腺癌细胞,22RV1细胞
XY1254 前列腺癌 p69细胞,
XY1255 奇异变形杆菌
XY1256 普通变形杆菌
XY1257 葡萄芽假丝酵母
XY1258 葡萄孢
XY1259 破伤风杆菌/梭菌Clostridium tetani
XY1260 平展米曲霉(米曲霉平展变种)
XY1261 平沙绿僵菌
XY1262 啤酒酵母
XY1263 皮下结缔组织细胞,A9细胞
XY1264 皮肤细胞,CCD-1095Sk细胞
XY1265 胚胎成纤维细胞,NIH/3T3细胞
XY1266 胚胎成纤维细胞,3T3-Swiss albino细胞
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