一、概要

克伦特罗（Clenbuterol）属于β-兴奋剂，因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。因此世界许多国家现已被明令禁止在饲料中添加克伦特罗来增加动物的瘦肉率。HPLC或GC-MS一直用作检测β兴奋剂的方法，但是其前处理步骤费用昂贵，而使用酶联免疫检测试剂盒方法则可以经济、快速地检测尿，血清，肌肉，肝脏及饲料中的CLE。

本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于45min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被克伦特罗抗原，样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，同时加入酶标二抗后，经TMB底物显色，样本的吸光值与其残留物克伦特罗呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。

三、适用范围

可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液、血清等样本中克伦特罗的残留量。

四、交叉反应率

克伦特罗 ………………………………………………100%

特普他林 ……………………………………………小于1%

非诺特罗 ……………………………………………小于1%

马布特罗 ……………………………………………小于1%

西马特罗 ……………………………………………小于1%

溴布特罗 ……………………………………………小于1%

塞曼特罗 ……………………………………………小于1%

五、提供的材料与试剂

酶标板、标准品、高浓度标准品、克伦特罗浓缩样品稀释液、克伦特罗酶标物、底物液A液、底物液B液、终止液、浓缩洗涤液、克伦特罗抗试剂

六、样本前处理步骤

（一）组织（带有低脂肪的肉、肝）：

取样，加组织样本提取液，振荡摇匀，离心，取上清液调pH值，离心，取上清液分析。

（二）尿液、血清：

取清亮尿样或血清样本直接测定。

（三）饲料前处理方法：

均质饲料样本，取样，加HCL溶液，振荡，离心，取上清液调pH值，离心，取上清液稀释，分析。

七、检测步骤

1.将所需试剂从冷藏环境中取出，平衡；

2.取出需要数量的微孔板；

3.洗涤工作液回温 ；

4.将样本和标准品对应微孔按序编号；

5.加标准品/样本；

6.洗板；

7.显色；

8.测定。

八、 结果判定

粗略判定：用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围；

定量判定：定量分析

九、检测方法灵敏度、准确度、精密度

试剂盒灵敏度：0.1ppb

样本检测下限：

组织样品…………………………………………0.3ppb

尿液样品…………………………………………0.1pb

饲料样品…………………………………………5ppb

回收率：

组织样品…………………………………………80±10%

尿液或血清样品…………………………………80±10%

精密度：试剂盒的变异系数均小于10%

十、储存条件

保存试剂盒于2~8℃；

有效期12个月。