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(1)人核仁素(NCL)检测试剂盒包被液的选择:一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下最终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
(2)人核仁素(NCL)检测试剂盒封闭:继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。但最终选用什么,要依据试验具体来实践。
(3)人核仁素(NCL)检测试剂盒洗涤板:可以说在ELISA操作中,洗涤是最主要的关键技术。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的,清除残留在板孔中游离的物质,以及非特异性地吸附的干扰物质,在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。所以在洗板时会有一定误差,人为因素很大(当然有条件的用洗板机除外),洗的不彻底或串了孔,对如此灵敏的ELISA系统可是不小的影响。
(4)加抗体标本(和二抗):注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用PBS稀释,也可用封闭液去稀释。如需加二抗,还要注意二抗的工作浓度,太高浪费,太低则着色浅。
(5)人核仁素(NCL)检测试剂盒显色:显色系统又很多,我们一开始做的时候,要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠。
每次做尽量要把阴阳空三个对照做好,如出现问题也好分析。
hzH538Ra 大鼠NFKB激活蛋白(NKAP)检测试剂盒规格 ELISA Kit for NFKB Activating Protein (NKAP)
hzD960Ra 大鼠雌激素受体相关受体α(ERRα)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Estrogen Related ReHZptor Alpha (ERRa)
hzE798Ra 大鼠核受体共激活因子3(NCOA3)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Nuclear ReHZptor Coactivator 3 (NCOA3)
hzE387Ra 大鼠高亲和力胆碱转运蛋白(ChT)检测试剂盒规格 ELISA Kit for High Affinity Choline Transporter (ChT)
hzB216Ra 大鼠松弛肽(RLN)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Relaxin (RLN)
hzB286Ra 大鼠乳脂球表皮生长因子8(MFGE8)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Milk Fat Globule EGF Factor 8 (MFGE8)
hzB742Ra 大鼠UDP葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)检测试剂盒规格 ELISA Kit for UDP GlucoHZ HZramide GlucosyltransferaHZ (UGCG)
hzF598Ra 大鼠转移关联蛋白2(MTA2)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Metastasis Associated Protein 2 (MTA2)
hzD949Ra 大鼠RAR相关孤儿素受体γ(RORγ)检测试剂盒规格 ELISA Kit for RAR Related Orphan ReHZptor Gamma (RORg)
hzA807Ra 大鼠岩藻糖苷酶αL1(FUCα1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for FucosidaHZ Alpha L1, Tissue (FUCa1)
hzA242Ra 大鼠摄食抑制因子1(NES1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Nesfatin 1 (NES1)
hzA819Ra 大鼠甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Parathyroid Hormone Related Protein (PTHrP)
hzB388Ra 大鼠中性粒细胞明胶酶关联脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Neutrophil GelatinaHZ Associated Lipocalin (NGAL)
hzA450Ra 大鼠激肽释放酶4(KLK4)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Kallikrein 4 (KLK5)人核仁素(NCL)检测试剂盒
hzA686Ra 大鼠Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTXⅡ)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Cross Linked C-Telopeptide Of Type II Collagen (CTXII)
hzB952Ra 大鼠组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Histone AHZtyltransferaHZ 1 (HAT2)
hzC350Ra 大鼠末端补体复合体C5b-9(C5b-9)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Terminal Complement Complex C5b-9 (C5b-10)
hzA306Ra 大鼠组织蛋白酶L(CTSL)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Cathepsin L (CTSL)
hzA149Ra 大鼠Ⅳ型胶原α1(COL4α1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Collagen Type IV Alpha 1 (COL4a2)
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