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2,4-二硝基苯肼实验步骤
HRP的制备
2,4-二硝基苯肼水提取:称取5kg用水冲刷干净的鲜辣根(辣根皮中亦含有丰富的HRP),用菜刀切成小碎块,在绞肉机中绞碎1~2次。碎渣浆用1倍体积的水低温下搅拌提取过夜(亦可采用高速抽提法)。次日用甩干机(或离心机)甩干,收集滤液,碎渣再用1/4倍体积水浸泡提取1次,合并2次滤液,测得总体积。
2,4-二硝基苯肼硫酸铵分级分离:在不断搅拌下,每1000mL滤液中慢慢加入226g硫酸铵粉末(相当于0.40饱和度,0℃),大约在1~2h内加完,置冷室中放置过夜。次日将上清液小心地用虹吸管移出,下面混浊液以3 000r/min离心15min,弃沉淀,合并上清液。再按每1000mL上清液加258g硫酸铵粉末(0.8饱和度)随加随搅拌,当硫酸铵全部溶解后,置冷室过夜。次日,虹吸出上清液,沉淀部分在冰冻离心机中以13000r/min离心20min,弃去上清液,收集沉淀。将沉淀悬浮于100~150mL蒸馏水中(加水量要使沉淀全部溶解为止),分装于透析袋内,放在流动自来水中进行透析1~2天,直到硫酸铵透析完毕为止(可用5%乙酸钡溶液或奈氏试剂进行检查)。然后改换成用蒸馏水透析,中间更换2~3次,用0.1mol/L硝酸银溶液检查透析外液无氯离子为止。将透析液合并,在冰冻离心机中以4 000r/min离心15min,弃去沉淀,量上清液的体积。
2,4-二硝基苯肼丙酮分级分离:将上清液倒入烧杯并置冰盐浴中,在不断搅拌下,用细滴管沿杯壁加入1倍体积预冷至-15℃的丙酮,放置片刻,在冰冻离心机中以4000r/min离心15min,弃去沉淀。上清液再加入0.8体积(按原上清液体积)-15℃丙酮,(操作同上),静置后,在冰冻离心机中离心收集沉淀。将沉淀溶于少量蒸馏水中,透析除去丙酮。可得RZ值近于1的酶溶液。
2,4-二硝基苯肼精制:将上步酶液适当稀释,滴加1mol/L硫酸锌溶液,使酶液中锌离子浓度为10 -3 mol/L,5 000r/min离心10min,得上清液。再将沉淀用少量蒸馏水洗涤,离心,洗液与清液合并,分装于透析袋内,用水透析除盐,用微孔滤膜过滤,进行真空冰冻干燥(约得20mg),产品呈米黄色纤维状松软物,HRP产品的RZ值可达3.0左右,置真空干燥器中低温保存。
HZA040Hu 中文名称:人趋化因子C-X3-C-基元配体1(CX3CL1)ELISA试剂盒 英文名称:for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA041Hu 中文名称:人中性粒细胞激活蛋白3(NAP3)ELISA试剂盒 英文名称:for Neutrophil Activating Protein 3 (NAP3)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA042Hu 中文名称:人粒细胞集落刺激因子(GCSF)ELISA试剂盒 英文名称:for Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA043Hu 中文名称:人胶质细胞系来源神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒 英文名称:for Glial Cell Line Derived Neurotrophic Factor (GDNF)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA044Hu 中文名称:人生长激素(GH)ELISA试剂盒 英文名称:for Growth Hormone (GH)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA045Hu 中文名称:人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)ELISA试剂盒 英文名称:for Colony Stimulating Factor 2, Granulocyte Macrophage (GMCSF)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA046Hu 中文名称:人糖蛋白130(gp130)ELISA试剂盒 英文名称:for Glucoprotein 130 (gp130)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA047Hu 中文名称:人肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒 英文名称:for Hepatocyte Growth Factor (HGF)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA548Hu 中文名称:人细胞间粘附分子1(ICAM1)ELISA试剂盒 英文名称:for Intercellular Adhesion Molecule 1 (ICAM1)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA049Hu 中文名称:人干扰素γ(IFNγ)ELISA试剂盒 英文名称:for Interferon Gamma (IFNg)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA592Hu 中文名称:人生长抑素(SST)ELISA试剂盒 英文名称:for Somatostatin (SST)ELISAkit 规格:48T/96T
CEA575Hu 中文名称:人胃动素(MTL)ELISA试剂盒 英文名称:for Motilin (MTL)ELISAkit 规格:48T/96T
CEA876Hu 中文名称:人降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒 英文名称:for Calcitonin Gene Related Peptide (CGRP)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA875Hu 中文名称:人碳酸酐酶Ⅰ(CA1)ELISA试剂盒 英文名称:for Carbonic Anhydrase I (CA1)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA469Hu 中文名称:人内皮脂肪酶(LIPG)ELISA试剂盒 英文名称:for Lipase, Endothelial (LIPG)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA800Hu 中文名称:人妊娠关联血浆蛋白A(PAPPA)ELISA试剂盒 英文名称:for Pregnancy Associated Plasma Protein A (PAPPA)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA399Hu 中文名称:人高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒 英文名称:for High Mobility Group Protein 1 (HMG1)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA397Hu 中文名称:人转化生长因子β受体Ⅰ(TGFβR1)ELISA试剂盒 英文名称:for Transfor ming Growth Factor Beta Receptor I (TGFbR1)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA396Hu 中文名称:人性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒 英文名称:for Sex Hormone Binding Globulin (SHBG)ELISAkit 规格:48T/96T
HZA395Hu 中文名称:人抑制素A(INHA)ELISA试剂盒 英文名称:for Inhibin A (INHA)ELISAkit 规格:48T/96T