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优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证人尿苷二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA试剂盒检测结果准确可靠的必要条件。ELISA 中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的本公司要求使用的纯化水电导率小于1.5μs/cm。
在临床实验室,对人尿苷二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA试剂盒准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是,在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20分钟以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。其次,目前的商品人尿苷二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外,当试剂盒以OPD为底物时,则底物溶液应在反应显色前临时配制。
保温
在建立人尿苷二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA试剂盒方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2 小时,产物的生成可达顶峰。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,反应板不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。由于公司的试剂盒温育是在空气浴中完成,采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应,边上的值会偏高,建议为了客观的判断结果,将质控放在非边缘位置。
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