产品详情
人大细胞肺癌细胞具体操作:
1.首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍,(这是前奏,即为第一步,目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。
2.然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步(可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)。
3.吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)这是第三步。
4.然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况你自己把握)。
人大细胞肺癌细胞应用举例:
1.细胞表面分子的检测与分析;
2.细胞内或细胞核内抗原检测与分析——如胞内细胞因子、调节性T细胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
3.细胞凋亡的检测与分析——如PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术(TUNEL)、细胞周期特异性细胞凋亡的检测(PI-Annexin-V,PA法);
4.DNA含量检测与细胞周期的分析——如药物对细胞周期的影响、流式细胞核型分析;
5.细胞增殖的检测与分析。
人大细胞肺癌细胞服务流程:
1.根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案;
2.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂,并优化转染条件;
3.杀伤曲线绘制;
4.转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
5.qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
人大细胞肺癌细胞注意事项:
1. 原代培养,一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限,如果不冻存,体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次,因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
一般实验流程
1筛选浓度测定:以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度
2细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖
3细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6)
4利用质粒上含有的抗性选择进行筛选
5鉴定筛选结果
人大细胞肺癌细胞相关产品展示:
yb-10784视网膜微血管内皮细胞Retinal microvascularendothelial cells
yb-10785角膜成纤维细胞Corneal fibroblasts
yb-10786脉络膜微血管细胞Choroidal cells
yb-10787牙周膜成纤维细胞Periodontal ligament fibroblasts
yb-10788人晶状体上皮细胞
yb-10789人角膜内皮细胞
yb-10790人视网膜色素上皮细胞
yb-10791人小梁网细胞
yb-10792人视网膜muller 细胞
yb-10793肺微血管内皮细胞Pulmonary microvascularendothelial cells
yb-10794肺血管平滑肌细胞Pulmonary vascular smooth musclecells
yb-10795Ⅱ型肺泡上皮细胞Type Ⅱ alveolar epithelialcells
yb-10796气管上皮细胞Tracheal epithelial cells
yb-10797气道平滑肌细胞Airway smooth muscle cells
yb-10798肺成纤维细胞Pulmonary fibroblastscells
yb-10799支气管上皮细胞Tracheal epithelial cells
yb-10800支气管成纤维细胞Tracheal fibroblasts cells
yb-10801肺大静脉平滑肌细胞Pulmonary vein smooth musclecells
yb-10802肺大动脉平滑肌细胞Aorta smooth muscle cell lung
yb-10803肺大动脉内皮细胞Aorta epithelial cells
yb-10804肺动脉成纤维细胞Aorta fibroblasts cells
yb-10805肺大静脉内皮细胞Pulmonary vein epithelial cells
yb-10806气管和支气管上皮细胞Tracheal and bronchialepithelial cells
yb-10807心肌细胞(成年)Myocardial cells
yb-10808心脏纤维原细胞Cardiac fibroblasts
yb-10809主动脉内皮细胞Aortic endothelial cells
yb-10810主动脉平滑肌细胞Aortic smooth muscle cells
yb-10811大隐静脉平滑肌细胞Saphenous vein smooth musclecells
yb-10812冠状动脉平滑肌细胞Coronary artery smooth musclecells
yb-10813大隐静脉内皮细胞Saphenous vein endothelial cells
yb-10814冠状动脉内皮细胞Coronary artery endothelialcells
yb-10815大鼠心肌细胞(成年)
yb-10816大鼠心肌细胞(新生大鼠)
yb-10817大鼠血管外膜成纤维细胞
yb-10818食管上皮细胞Esophageal epithelial cells
yb-10819食管平滑肌细胞细胞Esophageal smooth muscle cellsof the cell
yb-10820肠平滑肌细胞Intestinal smooth muscle cells
yb-10821肠粘膜上皮细胞Intestinal mucosa epithelialcells
yb-10822肠动脉内皮细胞Im artery endothelial cells
yb-10823肠静脉内皮细胞Im venous endothelial cells
yb-10824肝实质细胞The liver parenchyma cells
yb-10825肝动脉内皮细胞Hepatic artery endothelial cells
yb-10826肝动脉平滑肌细胞Hepatic artery smooth musclecells
yb-10827肝内胆管上皮细胞Intrahepatic biliary epithelialcells
yb-10828胃粘膜上皮细胞Gastric epithelial cells
yb-10829肝窦内皮细胞Sinusoidal endothelial cells
yb-10830肝星形细胞Hepatic stellate cells