产品详情
小鼠单核细胞白血病细胞具体操作:
1.首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍,(这是前奏,即为第一步,目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。
2.然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步(可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)。
3.吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)这是第三步。
4.然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况你自己把握)。
小鼠单核细胞白血病细胞应用举例:
1.细胞表面分子的检测与分析;
2.细胞内或细胞核内抗原检测与分析——如胞内细胞因子、调节性T细胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
3.细胞凋亡的检测与分析——如PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术(TUNEL)、细胞周期特异性细胞凋亡的检测(PI-Annexin-V,PA法);
4.DNA含量检测与细胞周期的分析——如药物对细胞周期的影响、流式细胞核型分析;
5.细胞增殖的检测与分析。
小鼠单核细胞白血病细胞服务流程:
1.根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案;
2.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂,并优化转染条件;
3.杀伤曲线绘制;
4.转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
5.qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
小鼠单核细胞白血病细胞注意事项:
1. 原代培养,一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限,如果不冻存,体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次,因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
一般实验流程
1筛选浓度测定:以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度
2细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖
3细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6)
4利用质粒上含有的抗性选择进行筛选
5鉴定筛选结果
小鼠单核细胞白血病细胞相关产品展示:
yb-10231人胚肾细胞-用于慢病毒包装293FT
yb-10232人胚肾细胞--用于慢病毒包装293TN
yb-10233大鼠成纤维细胞208F
yb-10234人肾透明细胞腺癌细胞786-O
yb-10235人胃癌细胞AZ-521
yb-10236小鼠黑色素瘤细胞B16-F0
yb-10237人胃上皮细胞GES-1
yb-10238人永生化表皮细胞HaCaT
yb-10239人回盲肠癌细胞HCT-8
yb-10240小鼠肝癌细胞Hepa1-6
yb-10241人胃癌细胞Hs 746T
yb-10242猪肾近曲小管上皮细胞LLC-PK1
yb-10243人正常乳腺上皮细胞MCF 10A
yb-10244人胃癌细胞MKN-45
yb-10245小鼠成纤维细胞NIH-3T3
yb-10246人胃癌细胞NUGC-3
yb-10247人胃癌细胞SNU-638
yb-10248人肝癌细胞SNU-739
yb-10249人舌鳞癌细胞Tca-8113
yb-10250人脑神经胶质瘤细胞U-373MG
yb-10251人肝癌细胞Hep3B
yb-10252人正常肝细胞HL-7702
yb-10253小鼠单核细胞白血病细胞Raw-Blue
yb-10254人胚肾细胞293-mTLR5
yb-10255人骨髓瘤细胞U266
yb-10256人膀胱癌细胞EJ
yb-10257肝卵圆细胞HOC
yb-10258人舌鳞癌细胞CAL 27
yb-10259人食管癌细胞Eca-109
yb-10260小鼠Lewis肺癌细胞LLC1[LL/2]
yb-10261人肺癌细胞PC9
yb-10262人肺癌细胞PC14
yb-10263人脐静脉内皮细胞HUVEC[HUV-EC-C]
yb-10264昆虫卵巢细胞Sf9
yb-10265大鼠乳腺癌细胞MADB-106
yb-10266猪肾上皮细胞PK(15)
yb-10267狗肾上皮细胞MDCK[NBL-2]
yb-10268猪肺泡巨噬细胞3D4/21
yb-10269猴胚胎肾上皮细胞marc-145
yb-10270人冠状动脉内皮细胞HCAEC
yb-10271猪骨髓间质干细胞Pig MSC
yb-10272人非小细胞肺癌细胞H322
yb-10273人鼻咽癌细胞CNE
yb-10274人食管癌细胞EC9706