产品详情
猪骨髓间质干细胞具体操作:
1.首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍,(这是前奏,即为第一步,目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。
2.然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步(可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)。
3.吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)这是第三步。
4.然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况你自己把握)。
猪骨髓间质干细胞应用举例:
1.细胞表面分子的检测与分析;
2.细胞内或细胞核内抗原检测与分析——如胞内细胞因子、调节性T细胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
3.细胞凋亡的检测与分析——如PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术(TUNEL)、细胞周期特异性细胞凋亡的检测(PI-Annexin-V,PA法);
4.DNA含量检测与细胞周期的分析——如药物对细胞周期的影响、流式细胞核型分析;
5.细胞增殖的检测与分析。
猪骨髓间质干细胞服务流程:
1.根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案;
2.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂,并优化转染条件;
3.杀伤曲线绘制;
4.转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
5.qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
猪骨髓间质干细胞注意事项:
1. 原代培养,一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限,如果不冻存,体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次,因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
一般实验流程
1筛选浓度测定:以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度
2细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖
3细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6)
4利用质粒上含有的抗性选择进行筛选
5鉴定筛选结果
猪骨髓间质干细胞相关产品展示:
yb0140 人肝癌细胞 SK-HEP-1
yb0141 人肝癌细胞 SMMC-7721
yb0142 人肝癌亚力山大细胞 PLC/PRF/5
yb0143 人张氏肝细胞 Chang liver
yb0144 人肝细胞 HL-7702[L-02]
yb0145 人肝癌细胞 Li-7
yb0146 人肝癌细胞 HuH-7
yb0147 人肝母细胞瘤细胞 HuH-6
yb0148 人肝胆管癌细胞 RBE
yb0149 人肝细胞 QSG-7701
yb0150 人肝永生化细胞 THLE-3
yb0151 人胆管细胞型肝癌细胞 HCCC-9810
yb0152 人胆囊癌细胞 GBC-SD
yb0153 人胰腺癌细胞 CFPAC-1
yb0154 人胰腺癌细胞 PANC-1
yb0155 人胰腺癌细胞系 SW 1990
yb0156 人原位胰腺腺癌细胞 BxPC-3
yb0157 人转移胰腺腺癌细胞 AsPC-1
yb0158 人结肠癌细胞 COLO 205
yb0159 人结肠癌细胞 HCT 116
yb0160 人结肠癌细胞 HT-29
yb0161 人结肠癌细胞 LoVo
yb0162 人结肠腺癌细胞 SW480 [SW-480]
yb0163 人结肠癌细胞 SW620
yb0164 人结肠腺癌细胞 SW1116
yb0165 人结肠腺癌细胞 COLO-320
yb0166 人结肠腺癌细胞 CW-2
yb0167 人结直肠腺癌细胞 Caco-2
yb0168 人结肠腺癌细胞 LS 174T
yb0169 人结肠腺癌细胞 RKO
yb0170 人结直肠腺癌细胞 HCT-15
yb0171 人结直肠腺癌上皮细胞 DLD-1
yb0172 人结肠癌转基因细胞 RKO-AS45-1
yb0173 人结肠癌转基因细胞 RKO-E6
yb0174 人回盲肠癌细胞 HCT-8 [HRT-18]
yb0175 人盲肠腺癌细胞(未分化) Hce-8693
yb0176 人胚肾细胞 2V6.11
yb0177 人胚肾细胞 293
yb0178 人胚肾细胞 293 Cells, low passage
yb0179 人胚肾细胞 AAV-293
yb0180 人胚肾细胞 293T
yb0181 人肾癌细胞 OS-RC-2
yb0182 人肾母细胞瘤细胞 SK-NEP-1
yb0183 人肾透明细胞腺癌细胞 786-O [786-0]
yb0184 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞 Caki-1
yb0185 人肾细胞腺癌细胞 ACHN
yb0186 人子宫内膜腺癌细胞 HEC-1-A
yb0187 人绒毛膜癌细胞 JEG-3
yb0188 人脐静脉细胞融合细胞 EA.hy926
yb0189 人膀胱癌细胞 5637
yb0190 人膀胱鳞癌细胞 SCaBER