产品详情
BGC-823-EGFP-puro细胞具体操作:
1.首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍,(这是前奏,即为第一步,目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。
2.然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步(可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)。
3.吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)这是第三步。
4.然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况你自己把握)。
BGC-823-EGFP-puro细胞应用举例:
1.细胞表面分子的检测与分析;
2.细胞内或细胞核内抗原检测与分析——如胞内细胞因子、调节性T细胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
3.细胞凋亡的检测与分析——如PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术(TUNEL)、细胞周期特异性细胞凋亡的检测(PI-Annexin-V,PA法);
4.DNA含量检测与细胞周期的分析——如药物对细胞周期的影响、流式细胞核型分析;
5.细胞增殖的检测与分析。
BGC-823-EGFP-puro细胞服务流程:
1.根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案;
2.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂,并优化转染条件;
3.杀伤曲线绘制;
4.转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
5.qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
BGC-823-EGFP-puro细胞注意事项:
1. 原代培养,一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限,如果不冻存,体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次,因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
一般实验流程
1筛选浓度测定:以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度
2细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖
3细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6)
4利用质粒上含有的抗性选择进行筛选
5鉴定筛选结果
BGC-823-EGFP-puro细胞相关产品展示:
yb-9215人卵巢癌细胞,COLO720E细胞
yb-9216人卵巢癌细胞,COLO-704细胞
yb-9217人卵巢癌细胞,COC1细胞
yb-9218人卵巢癌细胞,CaOV3细胞
yb-9219人卵巢癌细胞,A2780细胞
yb-9220人卵巢癌细胞,8910PM细胞
yb-9221人卵巢癌细胞,3AO细胞
yb-9222人卵巢癌顺铂耐药株 COC1/CDDP细胞
yb-9223人卵巢癌 C200细胞,
yb-9224人淋巴细胞与仓鼠肺细胞杂交细胞,FD6细胞
yb-9225人淋巴细胞与仓鼠肺细胞杂交细胞,FD4细胞
yb-9226人淋巴细胞瘤细胞,JK(Jurkat)细胞
yb-9227人淋巴母细胞,T2(174×CEM.T2)细胞
yb-9228人淋巴瘤细胞,CA46细胞
yb-9229人类胚胎肾脏表皮细胞,H293T细胞
yb-9230人口腔上皮癌细胞,KB细胞
yb-9231人口腔上皮癌长春新碱耐药株 KB/V细胞
yb-9232人口腔表皮样癌细胞,KB细胞,
yb-9233人口腔表皮样癌 KB细胞
yb-9234人口腔癌细胞,HB细胞
yb-9235人巨细胞性肺癌细胞,801-D细胞
yb-9236人巨细胞白血病细胞株 Mo7e细胞
yb-9237人巨核细胞保白血病细胞,Dami细胞
yb-9238人晶状体上皮细胞,HLEC细胞,
yb-9239人经典小细胞肺癌细胞,NCI-h1688细胞
yb-9240人结直肠腺癌细胞,SW620细胞
yb-9241人结直肠腺癌细胞,NCI-H716 [H716]细胞
yb-9242人结直肠腺癌细胞,LS174T细胞
yb-9243人结直肠腺癌细胞,HT-29细胞
yb-9244人结直肠腺癌细胞,HCT-15细胞
yb-9245人结直肠腺癌细胞,COLO320DM细胞
yb-9246人结直肠腺癌细胞,Caco-2细胞,
yb-9247人结直肠腺癌上皮细胞,DLD-1细胞,
yb-9248人结直肠癌细胞,LOVO细胞
yb-9249人结直肠癌细胞,HCT116细胞
yb-9250人结直肠癌细胞,Caco-2细胞
yb-9251人结肠直肠腺癌 NCI-H508 [H508]细胞
yb-9252人结肠腺癌细胞,SW480细胞
yb-9253人结肠腺癌细胞,SW480-EGFP-puro细胞
yb-9254人结肠腺癌细胞,SW480 [SW-480]细胞
yb-9255人结肠腺癌细胞,SW1116细胞
yb-9256人结肠腺癌细胞,RKO细胞
yb-9257人结肠腺癌细胞,LS180细胞
yb-9258人结肠腺癌细胞,LS 174T细胞
yb-9259人结肠腺癌细胞,HT-29细胞
yb-9260人结肠腺癌细胞,HCT-8细胞
yb-9261人结肠腺癌细胞,CW-2细胞
yb-9262人结肠腺癌细胞,CaCo2细胞
yb-9263人结肠腺癌肺转移细胞,T84细胞,