产品详情
人雪旺细胞具体操作:
1.首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍,(这是前奏,即为第一步,目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。
2.然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步(可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)。
3.吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)这是第三步。
4.然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况你自己把握)。
人雪旺细胞应用举例:
1.细胞表面分子的检测与分析;
2.细胞内或细胞核内抗原检测与分析——如胞内细胞因子、调节性T细胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
3.细胞凋亡的检测与分析——如PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术(TUNEL)、细胞周期特异性细胞凋亡的检测(PI-Annexin-V,PA法);
4.DNA含量检测与细胞周期的分析——如药物对细胞周期的影响、流式细胞核型分析;
5.细胞增殖的检测与分析。
人雪旺细胞服务流程:
1.根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案;
2.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂,并优化转染条件;
3.杀伤曲线绘制;
4.转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
5.qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
人雪旺细胞注意事项:
1. 原代培养,一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限,如果不冻存,体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次,因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
一般实验流程
1筛选浓度测定:以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度
2细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖
3细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6)
4利用质粒上含有的抗性选择进行筛选
5鉴定筛选结果
人雪旺细胞相关产品展示:
yb-1239 HeLa [ Chang Liver ](张氏肝细胞)
yb-1240 V79-4(中国仓鼠肺细胞)
yb-1241 CHL/IU [ CHL-11 ](中国仓鼠肺细胞)
yb-1242 CHO(中国仓鼠卵巢细胞)
yb-1243 BHK(幼仓鼠肾细胞)
yb-1244 R 1610(中国仓鼠体细胞)
yb-1245 BRL 3A(大鼠肝细胞)
yb-1246 NRK(大鼠肾细胞)
yb-1247 L929(成纤维细胞)
yb-1248 Y1(肾上腺皮质细胞)
yb-1249 CTLL-2(T细胞)
yb-1250 BALB/3T3(BALB/C小鼠胚成纤维细胞)
yb-1251 Ana-1(巨噬细胞)
yb-1252 SRSV/3T3(SRSV转化的3T3细胞)
yb-1253 3T6-Swiss albino(胚胎成纤维细胞)
yb-1254 PA317(成纤维细胞)
yb-1255 3T3-Swiss albino(胚胎成纤维细胞)
yb-1256 Mo-MuLv/3T3(Mo-MuLv感染的3T3细胞)
yb-1257 MRC-5(胚肺细胞)
yb-1258 WI-38(胚肺细胞)
yb-1259 FRhK-4(恒河猴胚肾细胞)
yb-1260 VERO C1008 (E6)(非洲绿猴肾细胞)
yb-1261 Pt K1 (NBL-3)(长鼻袋鼠肾细胞)
yb-1262 L1210(白血病细胞)
yb-1263 Neuro-2A(脑神经瘤细胞)
yb-1264 PC-12(肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)
yb-1265 HeLa(宫颈癌细胞)
yb-1266 A549 [A-549](肺癌细胞)
yb-1267 MCF7(乳腺癌细胞)
yb-1268 Hep 3B2.1-7(肝癌细胞)
yb-1269 MDA-MB-231(乳腺癌细胞)
yb-1270 Hep G2(肝癌细胞)
yb-1271 HCT 116(结肠癌细胞)
yb-1272 22RV1(前列腺癌细胞)
yb-1273 HT-29(结肠癌细胞)
yb-1274 KG-1(白血病细胞)
yb-1275 LoVo(结肠癌细胞)
yb-1276 THP-1(单核细胞白血病)
yb-1277 SW620(结肠癌细胞)
yb-1278 SK-N-SH(神经母细胞瘤细胞)
yb-1279 SH-SY5Y(神经母细胞瘤细胞)
yb-1280 COLO 205(结肠癌细胞)
yb-1281 T/G HA-VSMC(人主动脉血管平滑肌细胞)
yb-1282 HUVEC(人脐静脉血管内皮细胞)