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产品名称: 克球酚、乙胺嘧啶、氯霉素、恶喹酸、呋喃前处理试剂盒
产品货号: wi105242
产 地: 国产
1 适用范围
本方法适用于畜禽肉类及鳗鱼等中克球酚、乙胺嘧啶、氯霉素、恶喹酸、呋喃唑酮、磺胺类、沙星类兽药残留的检测。
2 方法原理
根据被检兽药的性质选择一定量的提取剂1、2将其从食品中提取出来,离心分离,取上清液10mL,在装有填料的层析柱上层析、吸附,再用洗脱剂将被测组分洗脱下来,旋转蒸干,残渣用流动相溶解后过滤,进液相色谱仪对被测克球酚、乙胺嘧啶、氯霉素、呋喃唑酮、磺胺类进行定性和定量分析。另取上清液5mL旋转蒸干,残渣用流动相溶解后过滤对恶喹酸、沙星类进行定性和定量分析。
3 所需设备和试剂
3.1 HPLC-紫外检测器或荧光检测器,250×4.6mm XDB-C18色谱柱(i.d.),或相当者;
3.2 旋涡混合器;
3.3 离心机-4000r/min;
3.4 旋转蒸发器;
3.5 均质机;
3.6 50mL具塞离心管;
3.7 50mL鸡心瓶;
3.8 抗生素残留快速检测前处理试剂盒(磺胺C);
3.9 冰乙酸-色谱纯;
3.10 乙腈-色谱纯;
3.11 三乙胺-分析纯;
3.12 磷酸-分析纯。
4 试料的制备
4.1 提取
称取样品约10.0g放入50mL离心管中,先后加入提取剂2及提取剂1后,用均质机以8000r/min的速度均质1min,在离心机上离心5min;
4.2 柱处理
将柱填料加入层析柱中,用胶棒敲实,然后加入柱激活剂。
4.3 过柱
待激活剂流完后取4.1中上清液10mL加入柱中,待上清液流完后加洗脱剂,用鸡心瓶收集该洗脱液,加入10mL异丙醇于50~55℃水浴旋转蒸干,残留物用1mL流动相及2mL 正己烷溶解,离心分离(≥3500r/min)。取下清液过针头过滤器,用液相色谱法定量检测克球酚、乙胺嘧啶、氯霉素、呋喃唑酮、磺胺类。
4.4另取4.1中上清液5mL放入鸡心瓶,加入5mL异丙醇于50~55℃水浴旋转蒸干,,残留物用1mL流动相及2mL 正己烷溶解,离心分离(≥3500ram/min)。取下清液过针头过滤器,用液相色谱法定量检测恶喹酸及沙星类。
5 测定
5.1 仪器条件
A、流动相:
克球酚、乙胺嘧啶、氯霉素、呋喃唑酮、磺胺类流动相:
乙腈+水+冰醋酸=20+79+1或0.05mol/L磷酸(三乙胺调pH=2.4)+乙腈=80+20,V/V;
沙星类、恶喹酸流动相:
0.05mol/L磷酸(三乙胺调pH=2.4)+乙腈=80+20,V/V;
B、检测波长:
克球酚、乙胺嘧啶、氯霉素、呋喃唑酮、磺胺类紫外检测器为275nm ;
沙星类、恶喹酸紫外检测器280nm;荧光检测器激发波长280nm,发射波长450nm。
C、流速:1.0mL/min;
D、进样量:10uL或20uL。
5.2 测定
取适量试样溶液和相应浓度的标准工作液,作单点或多点校准,以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样液中克球酚、乙胺嘧啶、氯霉素、恶喹酸、呋喃唑酮、磺胺类、沙星类兽药残留的检测。响应值均应在仪器检测的线性范围之内。
5.3 空白试验
除不加试料外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
5.4 结果计算和表述
按下式计算供试样品中克球酚、乙胺嘧啶、氯霉素、恶喹酸、呋喃唑酮、磺胺类、沙星类兽药残留的检测的残留量:
20VACS X= NMAS |
N-所取供试样液毫升数;
X-供试组织中兽药的残留量(μg/kg);
V-最终定量体积数(mL);
A-供试试料试样溶液中待检兽残色谱峰的峰面积;
M-供试试料样品重量(g);
AS-标准工作液中兽药的峰面积;
CS -标准工作溶液中兽药的浓度(μg /L);
20-为前处理试剂盒中提取剂1的体积数。
6 准确度、灵敏度、精密度
6.1 准确度
该实验方法在10μg /kg 、20μg /kg、50μg /kg添加水平的回收率为70-90%;
6.2 灵敏度
该实验方法定量下限克球酚、磺胺类、氯霉素、乙胺嘧啶为10μg/kg;沙星类、恶喹酸为5μg/kg。
6.3 精密度
该实验验方法的批内变异系数为≤10%,批间变异系数≤15%。