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小鼠PKB试剂盒为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡?如何振荡?
振荡孵育使反应更充分,振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。
孵育过程振荡,可以加快、加强抗原抗体分子间的相互碰撞接触,使得反应过程更加完全,OD值通常会比未振荡孵育的结果要高;洗涤过程振荡,可以使洗板更干净,在很大程度上能降低背景值,同时可以提高试剂盒检测的灵敏度,具体操作请参见说明书。
小鼠PKB试剂盒何时终止ELISA反应?
ELISA实验最终需要酶催化底物显色反应来完成,在最佳时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反应系统中,当最高浓度标准品颜色不再变深,倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时,便需要终止反应;或者也可以根据最高浓度标准品孔在620nm的OD值来决定,OD620=0.9-0.95之间时即可终止。
小鼠PKB试剂盒为什么酶标仪读数时必须选用双波长?
首先,酶标仪使用前务必预热10-15min,使测读结果更稳定。其次,ELISA实验采用双波长测定吸光度,可以排除单波长检测时的测定干扰(标本的浓度,干扰色等)。一般采用最大波长作为参照波长,在参照波长下,检测物的吸光值最小,检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收;因此,双波长测定,可最大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差,以保证实验数据的准确度。
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