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细胞名称:RKO-AS45-1 人结肠癌转基因细胞
组织来源:结肠癌,整合起动GADD45a表达载体的CMV启动子
培养条件:MEM +10% FBS
形 态:贴壁;上皮细胞样
背 景:人的cDNA中编码GADD45的开放阅读框克隆到表达载体pCMV.3中,转染结肠癌细胞RKO,建立了RKO-AS45-1细胞株。该细胞含有稳定整合巨细胞病毒(CMV)启动子的表达载体。RKO-AS45-1细胞系和它的母系RKO一起可用于Gadd45对DNA修复、凋亡和药物敏感性研究。
RKO-AS45-1细胞;人结肠癌转基因细胞传代后不贴壁了,成团浮在培养基里,怎么办?细胞,落层生长后,消化传代,可能细胞密度大,吹打的时候有一些细胞还是成团的,可是大部分已经成单个的了,24小时后观察,细胞都成团了,不贴壁,应该没有污染。现在怎么办?重新吹打能散开吗?
技术回答:RKO-AS45-1细胞;人结肠癌转基因细胞密度过大细胞老化了,消化后聚团不贴壁说明细胞状态不好,建议重新复苏细胞。如果不甘心可以重新吹散了试试看,不过估计贴壁的也很少。可以低俗离心把状态不好的聚团细胞去除,然后把上层液体里面的细胞转移至6孔板或者24孔板培养,具体根据最后分散细胞的数量来哦~
重新吹打了RKO-AS45-1细胞;人结肠癌转基因细胞,还是有很多贴壁的细胞,可是还是有好多细胞碎片浮着,换了液还是有好多浮着。另外,培养瓶老是弄不均匀,就瓶子的四边都很密集,其他就很均匀,不知道会不会影响细胞状态?
技术回答:密集的地方容易老化,对RKO-AS45-1细胞;人结肠癌转基因细胞整体状态还是会有影响的~ 得想办法让传代的细胞均匀分布。传代完后做一下前后左右的十字运动~
细胞处理:细胞如果裂解后,RNA在普通环境下会很快降解。想要不降解,可以考虑:1.加T-Zol裂解液,-80度保存;2.分选后按细胞冻存步骤冻存,存于-80度,应该能放3-6个月。
RKO-AS45-1细胞;人结肠癌转基因细胞培养:图片聚焦没聚准,聚团现象不是很严重,状态看着也还行。悬浮细胞对血清要求较高,可以考虑换好点的血清看看。
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