产品详情
上海远慕生物是美国Omega品牌代理商,代理出售旗下全系列提取试剂盒及耗材,配件,溶液。产品包含:无内毒素小量质粒提取试剂盒I/II,无内毒素中/大量提取试剂盒,无内毒素小量质粒提取试剂盒 I/II,BAC/PAC 大型质粒小提/大提试剂盒,M-13单链DNA提取试剂盒,磁珠质粒大量提取试剂盒,96孔磁珠无内毒素大量提取试剂盒,聚丙烯酰胺凝胶回收纯化试剂盒,超薄柱型PCR产物纯化试剂盒,水样DNA提取试剂盒,动物组织直接PCR试剂盒,1.2ml带盖固定圆底收集板,磁珠分离架,96孔不透气封口膜,Dnase试剂盒,其他系列等,欢迎来电了解更多提取试剂盒详情。
名称:无内毒素小量质粒提取试剂盒I/II
品牌:Omega
供应商:上海远慕
货号/型号:
用途:从培养过夜的菌液中提取30ug/70ug无内毒素质粒DNA
无内毒素小量质粒提取试剂盒特性与优点:
安全-无酚氯仿等有机物抽提
可靠-操作简单,每次都能获得理想的效果
无内毒素-内毒素含量低于0.1EU/μg
无内毒素小量质粒提取试剂盒I/II操作方法:
1.取过夜培养的菌液1.8 ml加入到2ml EP管中,13,000rpm室温离心1min后收集细菌沉淀。倒掉上清液,再次加入菌液1.8 ml,离心后去除上清液。
2.每管加入150 μl Buffer A,用吸头吹打菌体至无可见细菌团块,以确保沉淀完全散开。
3.每管加入200 μl Buffer B,轻轻颠倒离心管4-6次,室温放置5min,使细菌完全裂解,溶液应变的透明。切勿剧烈振荡,否则会导致基因组DNA断裂,从而导致所得质粒被基因组DNA污染。 注意:加入Buffer B后,务必室温放置5分钟,以使RNase A充分发挥作用。
4.每管加入350 μl Buffer C,随即颠倒离心管4-6次混匀(切勿剧烈振荡),可见白色絮状物产生,静置30s。
5.手腕用力上下振荡4-6次,使白色絮状物振散,然后置于离心机上13,000rpm室温离心5min。
6.将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内,13,000rpm离心30s,倒弃收集管内液体。(切勿吸入白色沉淀,否则会堵塞离心柱)。
7.向吸附柱内加入500 μl内毒素去除液,13,000rpm离心30秒,倒弃收集管内液体。
8.在质粒纯化柱内加入500 μl Washing Buffer(务必确认已加入无水乙醇),13,000rpm室温离心30s,洗去杂质,倒弃收集管内液体。
9.重复步骤8一次。
10.将吸附柱重新放入套管中,13,000rpm室温离心2min。
11.将质粒纯化柱置于新的1.5ml离心管上,静置2min,使痕量乙醇完全挥发,加入40-100 μl Elution Buffer至管内柱面上,放置1min。Elution Buffer使用前最好50°C水浴预热。
12.13,000rpm室温离心2min,所得液体即为高纯度质粒。
无内毒素小量质粒提取试剂盒认知:
内毒素(Endotoxin)是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖,它能引起哺乳动物发热,甚至会导致动物休克。常规的质粒纯化试剂盒由于无法去除内毒素的污染,从而大大降低了质粒转染的效率。
Omega公司采用独特的内毒素吸附缓冲液(ETR Solution),能有效去除质粒中的内毒素污染,纯化的质粒中内毒素含量小于0.1EU/μg,可大大提高转染实验效率和动物注射效果。从培养过夜的菌液中收集细菌后,采用经典的碱裂解法裂解细菌,离心去除染色体DNA和蛋白质,得到含有质粒和内毒素的上清液,加入ETR Solution吸附内毒素,得到不含内毒素的上清液,调节结合条件并转移至硅胶柱,离心吸附质粒DNA,经两种溶液洗涤去除残余蛋白质和各种杂质,最后用Endotoxin-free Elution Buffer洗脱出质粒DNA。
质粒小量提取试剂盒部分相关产品如下:
通用质粒提取试剂盒
动物组织总RNA提取试剂盒
离心柱型禽类全血基因组DNA提取试剂盒
树脂型酱油类基因组DNA提取试剂盒
鼠尾基因组DNA提取试剂盒
土壤基因组DNA提取试剂盒
口腔拭子基因组DNA提取试剂盒
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普通质粒提取柱子
去内毒素质粒小量提取试剂盒
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BAC/PAC DNA Kit (5)(质粒抽提试剂盒系列)D2156-00
Fastfilter BAC/PAC DNA Kit (4x96)(质粒抽提试剂盒系列)D1055-01
M13 DNA Kit (50)(质粒抽提试剂盒系列)D6900-01
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