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TGM2蛋白;谷氨酰胺转胺酶2(TGM2)重组蛋白
英文名称:Recombinant Transglutaminase 2 (TGM2)
tTG; TG2; C Polypeptide,Protein-Glutamine-Gamma-Glutamyltransferase; Transglutaminase 2, Tissue; Transglutaminase C; Transglutaminase H
来源:原核表达
宿主:E.coli
规格:10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)具体详见说明书
片段与标签:Ile166~Tyr369 with N-terminal His Tag
物种来源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猕猴、山羊、绵羊、马、牛、猪、鸡、狗等其他物种多物种)相同的名称,不同的物种。
性状:冻干粉
表达系统: 大肠杆菌
产品纯度:>95%-98%(SDS-PAGE & RP-HPLC)
保存条件:如果样品在2-4周内使用,可以在4°C低温储存。
TGM2蛋白;谷氨酰胺转胺酶2(TGM2)重组蛋白操作步骤
1.用缓冲液A漂洗菌体细胞(10ml/g), 离心6000g×15min,收集菌体细胞,重复此步骤,将菌体细胞再在缓冲液A中洗涤一次。
2.将漂洗过的菌体细胞悬浮于缓冲液B中,超声破碎,镜检,破碎率高于95%,离心1500g×30min,收集包涵体沉淀。
3.将包涵体沉淀用缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ、缓冲液Ⅲ分别超声洗涤一次,1500g 离心收集包涵体沉淀。
4.包涵体的溶解:用含高浓度脲素的缓冲液室温放置30min,然后离心1500g×30min,留上清。将溶解后的蛋白质适当稀释,磁力搅拌,透析过夜。
5.溶解后的包涵体蛋白可通过亲和层析进一步纯化。
如果TGM2蛋白;谷氨酰胺转胺酶2(TGM2)重组蛋白没有表达很有可能的原因有两个:
1.载体构建错误。 另外有些酶产生粘端有些酶产生平端,这些都容易导致读码框错误,从而表达不出来。抗生素抗性/载体多次传代,特性发生变化;
2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体,或者特殊用途的载体,或者有特殊启动子的载体,必须选择合适的宿主菌进行表达。因此,当你的蛋白没有表达出来时,可以考虑更换宿主菌;
至于是否选择rosetta菌株,我认为倒不是最关键的:Rosetta的功能是补充6种稀有密码子对应的tRNA,提高外源基因,特别是真核基因在原核中的表达水平。Rosetta会提高表达水平,不会对蛋白的表达起有或无的影响。
另外,需要确定你所有试剂准确无误,我自己在早期实验的时候,有的试剂是实验室传下来的,有些是问别人借的,其中载体,宿主菌以及抗生素都出现过问题,你要确定你用的试剂来源和性质没有问题,这个非常关键。
多肽的融合表达纯化服务:擅长做多肽(小于10kDa)的融合表达纯化,通过蛋白酶去除融合标签蛋白,最终获得高纯度的小肽,氨基酸序列与天然多肽一致。
蛋白原核的可溶表达纯化:通过与融合标签融合表达,以及通过表达菌株及表达条件的优化,使得目的TGM2蛋白;谷氨酰胺转胺酶2(TGM2)重组蛋白以可溶的形式表达,进而放大纯化。
包涵体变复性:原核表达优化后仍然是包涵体,通过对包涵体的洗涤,去除大量的杂蛋白,用变性剂变性,对复性条件进行优化,获得复性蛋白。