柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒

英文名称：Column Plant Chloroplast DNAOUT

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

提取植物叶绿体的DNA

产品及特点 

本试剂盒是结合植物叶绿体纯化试剂盒和柱式植物 DNA 抽提试剂盒而推出

的新兴产品，专门用于植物叶绿体 DNA 的快速提取。它具有下列特点：

1. 纯度高，不含污染和抑制剂，可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、

multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting, microsatellite

analysis 等各种后续分子生物学实验，不会发生离心柱堵塞现象。

2. 产率一般在 1-2 ug/1 g 叶片样品。OD260/280 一般在 1.8 以上。DNA 片

段长度一般在 40-50 Kb 左右。

3. 本产品足够 15 次提取，每次可处理 30g 叶片。

4. 已经成功用于菠菜，大豆，莴笋，白菜，烟草和甜菜等双子叶植物，也适用

于单子叶等其他植物（可能需要优化条件）。

运输及保存 常温运输和保存（但匀浆液成分二长期保存时需要放 4℃）, 保存期限一年。

自备物品 去离子水、氯仿、Waring 匀浆机、烧杯、量筒

使用方法 注意：叶绿体对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用

器皿和溶液均需要在 4℃预冷。离心时一定要在 4℃进行，离心力以 g 而不是 rpm

计算。如果需要研究叶绿体的功能，提取还需要在昏暗的光线条件下进行。强烈

建议用显微镜监控整个过程中叶绿体的回收情况。

一：叶绿体的纯化

1. 实验前 1-2 天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成，否则离

心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净，再用

蒸馏水淋洗，去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理，则保存时需要

保持叶片湿润，即使如此，叶片的放置时间也不能超过一天。

2. 计算实验所需叶绿体匀浆液的体积（下面简称匀浆液），本试剂盒一次实验可

处理 30 g 叶片，对一般植物，每克叶片需要准备 4 mL 匀浆液，则一次实

验需要准备 120mL 匀浆液。对烟草和大豆，每克叶片需要 6 mL 匀浆液，

则一次实验需要准备 180mL 匀浆液。为了保险可以多配 10%。

3. 实验当天制备匀浆液。制备方法是：将自备的去离子水与试剂盒提供的匀浆

液成分一在干净的玻璃或塑料容器中按 4：1 的比例混合，然后在每 100 mL

混合液中加入匀浆液成分二干粉 0.1g（终浓度为 0.1%），轻柔搅拌 10 分钟

后，所得溶液即为匀浆液。冰上预冷待用。匀浆液只能当天使用，不能放置。

4. 预留 1.5mL 用于悬浮叶绿体，其余匀浆液转移到 Waring 匀浆机（即家用

制备果汁的匀浆机）中，再快速将新鲜植物叶片的叶脉去除，再将叶片剪成

1-3 cm2大小的碎片，浸泡在匀浆机里面的匀浆液中。

5. 低速匀浆 10 秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的叶碎片按入到匀浆机底部，

再低速匀浆 10 秒。注意：还可用 Dounce 玻璃匀浆器，Polytron 匀浆机和

研磨（加玻璃珠）等匀浆，但它们单次处理量小，需分成很多份处理后再汇

集，非常不方便。

6. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，用预冷的 200 mL 量筒收集穿透液，再等分到

4 个预冷的 50 mL 的塑料离心管中（每个管中的穿透液不要超过 35 mL）。

带柄尼龙滤膜洗涤干净后可反复使用。

7. 在水平转子离心机上 4℃ 200 g 离心 3 分钟（对菠菜，白菜和莴笋材料）或

400 g 离心 1 分钟（对甜菜材料），白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。其

他植物材料则需要用户自己摸索离心力。

8. 将上清液（含叶绿体）转移到一个新的、预冷的 50 mL 塑料离心管中。

9. 在水平转子离心机上 4℃ 1000 g 离心 7 分钟，小心弃上清，沉淀含叶绿体。

10. 在沉淀中加入 1.5 mL 预冷的匀浆液，手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意：

重悬时避免溶液起泡，也不要用枪头吹打，否则叶绿体容易破裂。沉淀

下有白色淀粉属于正常现象，但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。

11. 将 4 管叶绿体重悬液汇集（共约 6 mL），得到叶绿体粗提液。

12. 如果对叶绿体 DNA 是否含细胞核 DNA 的要求不高，则叶绿体粗提液可以直

接用于叶绿体 DNA 纯化，具体操作是在水平转子离心机上 4℃ 1000 g 离

心 7 分钟，小心弃上清，沉淀为叶绿体，直接用于 DNA 纯化（见步骤二）。

13. 如果需要无细胞核 DNA 污染的叶绿体 DNA，则按以下流程操作：在 50 mL

塑料离心管中先加入 6 mL 匀浆液成分一和 4 mL 的 Percoll，充分混合均匀

得到 40%的 Percoll 溶液，在其液面上小心铺上 6mL 的叶绿体粗提液，在

水平转子离心机上 4℃ 1700 g 离心 6 分钟，管底绿色沉淀为完整的叶绿体，

液面的绿色部分为破碎的叶绿体。小心将上清去除后，直接将沉淀（完整叶

绿体）用于叶绿体 DNA 纯化（见步骤二）。

二：叶绿体 DNA 的纯化（溶液 A 和溶液 B 容易产生沉淀，溶液 B 十分粘稠，均

需 65℃溶解并摇匀后待用）

14. 将 600 uL 预热的溶液 A 加入到叶绿体沉淀中后充分吹打混匀。

15. 加入 300 uL 预热的溶液 B，震荡混匀 10-30 秒。注意：溶液 B 非常粘稠，

可以采取称量方法称取 300mg（约等于 300uL）使用或将 1 mL 枪头剪去

一截后再吸取 300uL 使用。

16. 65℃放置 3-5 分钟。如果室温放置，DNA 产量会降低 10-20%。

17. 加入 200 uL 自备氯仿，震荡混匀 10-30 秒。

18. 12,000 rpm 室温离心 2 分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小

心转移上清液（约 0.8 mL）到一个新的 3-5 mL 离心管中，避免触及中间

层的白膜，可留少量上清不取。

19. 加入 1.5 倍体积(约 1.2 mL)的溶液 C，颠倒混匀后先转移 0.7 mL 到离心吸

附柱中，室温放置至少 2 分钟。12,000 rpm 室温离心 1 分钟，DNA 将吸

附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。

20. 再将剩余的溶液按上步方法上柱。

21. 将 0.5 mL 通用洗柱液加入到吸附柱中，12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃

穿透液。重复操作一次。空甩半分钟去除残留液体。

22. 将离心吸附柱放置在一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加 50-100 uL DNA 洗

脱液 2.0，室温放置 3-5 分钟。

23. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟即得植物叶绿体 DNA 溶液，直接取 5-10 uL

电泳检测，其余放冰箱备用。