DNA粘转平试剂盒

英文名称：DNA Polishing Kit

运输：低温

保存：负20度

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品及特点 

本产品利用 Pfu DNA polymerase 所具有 3’到 5’的聚合酶活性和

5’到 3’外切酶活性，将 3’和/或 5’突出的 DNA 片段转化成平末端, 用

于克隆工作。

1. 简单，精心优化过的 2 X Polishing Buffer 中含有所需要的所有成

分，不需要单独准备。

2. 适用于任何平末端的 DNA 载体。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂 DNA 片段

使用方法 1. DNA 片段的准备：

无论是来源 Taq, Tth, T7, Klenow 和 Vent 等 DNA 聚合酶合成的 DNA

片段，还是用限制性内切酶制备的 DNA 片段，粘转平之前均需要将 DNA 沉

淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀 DNA 的方法包括经典的盐/纯沉淀法，

离心柱 DNA 吸附法和天泽基因的一管式非醇超快 DNA 沉淀法。

2. 设置粘转平（Polishing）反应：

在一个干净的离心管中，分别加入

10-500 ng 3’或 5’突出的 DNA 片段

25 uL 2 X Polishing Buffer

1 uL Pfu DNA polymerase

补水到 50 uL

72℃保温 2 小时。

注意：如果不使用热盖式 PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量

液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。

3. 反应后处理

粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于 T4 DNA 连

接酶催化的连接反应。对 10 uL 的连接反应体系，一般需要加入 1-2 uL 粘

转平反应液。由于 Pfu DNA polymerase 在连接反应的温度条件下几乎没有

活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。