产品详情
动物胞浆蛋白微量制备试剂盒
英文名称:One-Step Cytoplasmic Protein Miniprep Kit
运输:常温
保存:常温
有效期:1年
货期:1-2天
其他:
产品介绍:
微量制备动物胞浆蛋白
产品及特点
DNA 只存在于细胞核内,因此参与转录调节和 DNA 复制的蛋白质主要存在于
细胞核中,要研究蛋白质与 DNA 的相互作用,首先需要制备能够与 DNA 作用的
天然细胞核蛋白质。目前、细胞核蛋白质制备方法一般都比较繁琐,一次处理大量
样品时尤其不便,为此本公司开发了本产品,用于从哺乳动物组织和培养细胞核蛋
白的微量提取,它具有下列特点:
1. 提取制备过程简便,只需要一小时。
2. 实验重复性好,尤其适合同时处理多个样品。
3. 可用于培养的动物细胞,也可以用于组织细胞。
4. 制备的核蛋白能保持天然活性,可以直接用于转录因子活性分析、凝胶阻滞实
验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足迹图实验和甲
基化干扰实验酶活性测定等研究。
运输及保存 低温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂 PBS 缓冲液,PMSF 溶液,DTT 溶液
使用方法 1、 对贴壁细胞:将 5×10
5-7 个细胞培养到覆盖率为 55-65%,吸弃培养基,用
自备的预冷 PBS 缓冲液洗涤细胞一次,将细胞从壁上小心刮下,转移到预冷
的塑料离心管中,4℃ 3000 rpm 离心 5 分钟,小心弃上清。直接进入第三
步进行后续处理。
2、 对悬浮细胞:直接将 5×105-7 个的悬浮细胞转移到 1.5 mL 预冷的塑料离心管
中,4℃ 3000 rpm 离心 5 分钟,用自备的预冷的 PBS 洗涤细胞沉淀一次,
3000 rpm 离心 5 分钟,小心弃上清。直接进入第三步处理细胞沉淀。说明:
悬浮细胞制备胞浆的效果一般好于贴壁细胞。
3、 在细胞沉淀中加入相当于沉淀细胞体积 5 倍或更多的预冷的溶液 A 重悬细胞,
一般不超过 300 uL-500 uL 溶液 A。溶液 A 在临用前最好加入终浓度为 0.2
mM 的 PMSF 和 1mM 的 DTT。PMSF 和 DTT 在水溶液中都不稳定,只能
临用提加入。
4、 冰浴静置 10 分钟。
5、 将细胞转移到预冷的 15 mL 的 Dounce 或 Potter 玻璃匀浆器中(温和破裂细
胞用),上下匀浆 10-15 次(为检查效果,可取少量裂解物与自备的 0.01%
Trypan Blue 溶液混合,在显微镜下观察,只有破裂细胞的细胞核才能染色,
完整细胞无色。如果需要,可增加匀浆次数直到 80-90%以上的细胞裂解为
止 )。
6、 小心转移到预冷的离心管中,4℃ 17000g 离心 15 分钟,线粒体,细胞核等
细胞器将沉淀到管底。保留上清(胞浆部分)待用。