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大肠杆菌BL21-CodonPlus-RIL菌种
英文名称:E.coli BL21-CodonPlus-RIL Strain
运输:低温
保存:-80度
有效期:3年
货期:现货
其他:
产品介绍:
大肠杆菌 BL21-CodonPlus-RIL 菌株是专门用于表达富含 AT 基因的 B 系
菌种,它有下列特点:
1. 携带 pACYC-RIL 质粒,质粒上面有 3 种 tRNA 基因,可以克服大肠杆菌
在表达富含 AT 的基因的菌种时候,自身的相关稀有密码子不够而影响产
量的问题。
2. 缺失 lon 和 ompT 两个蛋白酶基因,有利于外源蛋白的纯化。
3. EcoB 系统 Eco 位点识别能力缺失,导致 EcoB 甲基化修饰和限制功能均
失,甲基化和非甲基化质粒均可转入本菌种。
4. Dcm 甲基化系统完整,制备的质粒是甲基化的。
5. 内源核酸酶缺失,有利于质粒 DNA 的制备。
6. 具有氯霉素和四环素抗性。
运输及保存 低温运输,-80℃保存,有效期一年。
自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等
使用方法
质粒转化大肠杆菌BL21-CodonPlus-RIL菌种的方法有很多,如电转化、化学转化等。
根据实验方法的不同,用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方
法。
1. 挑取酵母单菌落,接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中,
30℃,250-300 r/min 培养过夜;
2. 取 100-500 μL (≤1:100)的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的
200 mL 三角摇瓶中,28~30℃,250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时),
至 OD600 达到 1.3~1.5;
3. 将细胞培养物于 4℃,1500g 离心 5 分钟,用 50 mL 的冰预冷的无菌水
将菌体沉淀重悬;
4. 按步骤 3 离心,用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬;
5. 按步骤 3 离心,用 2-5 mL,1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬;
6. 按步骤 3 离心,用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬,
其终体积约为 240 uL;
7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中,与 80 μL 的上
述步骤 6 所得的菌体混匀,转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中;
8. 将电转化杯冰浴 5 分钟;
9. 根据电转化仪提供的资料,参考其他文献及多次摸索,确定合适的电压、
电流、电容等参数,按优化的参数,进行电击(推荐:电压 1.5 kV ;电
容 25 μF ;电阻 200 Ω;电击时间为 4 ~10 msec)。
10. 电击完毕后,马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀,转
至 1.5 mL 的 EP 管中,置于 30℃摇床低速培养 1 小时;
11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上,每 200~600 μL 涂布一块平板;
12. 将平板置于 30℃倒置培养,直至单个菌落出现(3-4 天)。
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