大肠杆菌BL21-CodonPlus-RP菌种

英文名称：E.coli BL21-CodonPlus-RP Strain

运输：低温

保存：-80度

有效期：3年

货期：现货

其他：

产品介绍：

 BL21-CodonPlus-RP 菌株专门用于表达富含 GC 的基因，它有下列特点:

1. 携带 pACYC-RP 质粒，质粒上面有 2 种 tRNA 基因，可以克服大肠杆菌

在表达富含 GC 的基因的菌种时候，自身的相关稀有密码子不够而影响产

量的问题。

2. 缺失 lon 和 ompT 两个蛋白酶基因，有利于外源蛋白的纯化。

3. EcoB 系统 Eco 位点识别能力缺失，导致 EcoB 甲基化修饰和限制功能均

失，甲基化和非甲基化质粒均可转入本菌种。

4. Dcm 甲基化系统完整，制备的质粒是甲基化的。

5. 内源核酸酶缺失，外源 DNA 稳定。

6. 具有氯霉素和四环素抗性

运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等

使用方法 

质粒转化大肠杆菌BL21-CodonPlus-RP菌种的方法有很多，如电转化、化学转化等。

根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方

法。

1. 挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中，

30℃，250-300 r/min 培养过夜；

2. 取 100-500 μL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的

200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)，

至 OD600 达到 1.3~1.5；

3. 将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水

将菌体沉淀重悬；

4. 按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；

5. 按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；

6. 按步骤 3 离心，用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，

其终体积约为 240 uL；

7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，与 80 μL 的上

述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；

8. 将电转化杯冰浴 5 分钟；

9. 根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、

电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电

容 25 μF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。

10. 电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转

至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；

11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一块平板；

12. 将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。