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大肠杆菌C41(DE3)菌种
英文名称:E. coli C41(DE3) Strain
运输:低温
保存:-80度
有效期:3年
货期:现货
其他:
C41(DE3)菌株能有效表达来源于各个物种包括细菌酵母,植物,病毒和
动物等多个物种的有毒蛋白,这是因为该菌的基因存在突变,可以包容有毒蛋
白的表达。C41(DE3)来源于 BL21(DE3),含有一个基因突变,能够降低 T7
RNAP 的酶活力,所以能够阻止表达有毒蛋白细胞的死亡。正如标准的
BL21(DE3)菌株 C41(DE3)是??DE3 的溶源性菌株,它在 lacUV5 启动子额
下游含有 T7 RNA 聚合酶基因,适合表达克隆于 T7 启动子表达载体上的基因。
但是,C41(DE3)存在 Ion 和 ompT 蛋白酶的缺陷,而且蛋白表达量比
BL21(DE3)稍低。本菌株基本信息如下:
1. 抗性:无。
2. 培养基:LB。
3. 菌株类别:大肠杆菌。
4. 培养条件:37℃,有氧,LB。
5. 质粒转化:42℃热激。
6. 保存方式:20%甘油,-20℃。
7. 基本应用:用于蛋白表达。
8. 基因型:F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)
运输及保存 低温运输,-80℃保存,有效期一年。
自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等
使用方法
质粒转化大肠杆菌C41(DE3)菌种的方法有很多,如电转化、化学转化等。
根据实验方法的不同,用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方
法。
1. 挑取酵母单菌落,接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中,
30℃,250-300 r/min 培养过夜;
2. 取 100-500 μL (≤1:100)的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的
200 mL 三角摇瓶中,28~30℃,250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时),
至 OD600 达到 1.3~1.5;
3. 将细胞培养物于 4℃,1500g 离心 5 分钟,用 50 mL 的冰预冷的无菌水
将菌体沉淀重悬;
4. 按步骤 3 离心,用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬;
5. 按步骤 3 离心,用 2-5 mL,1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬;
6. 按步骤 3 离心,用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬,
其终体积约为 240 uL;
7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中,与 80 μL 的上
述步骤 6 所得的菌体混匀,转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中;
8. 将电转化杯冰浴 5 分钟;
9. 根据电转化仪提供的资料,参考其他文献及多次摸索,确定合适的电压、
电流、电容等参数,按优化的参数,进行电击(推荐:电压 1.5 kV ;电
容 25 μF ;电阻 200 Ω;电击时间为 4 ~10 msec)。
10. 电击完毕后,马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀,转
至 1.5 mL 的 EP 管中,置于 30℃摇床低速培养 1 小时;
11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上,每 200~600 μL 涂布一块平板;
12. 将平板置于 30℃倒置培养,直至单个菌落出现(3-4 天)。