产品详情
大肠杆菌DH5α菌种
英文名称:
运输:低温
保存:-80度
有效期:3年
货期:现货
其他:
产品介绍:
本菌种是美国科学家 D. Hanahan 在 1983 年首次报道的 K-12 系大肠杆
菌菌株,它是以 DH1 为基础构建的,是分子生物学中最常用的用于克隆的大
肠杆菌菌株,其主要特点如下:
1. 转化效率比 DH1 更高,适用于分子克隆。
2. 脱氧核糖组成型合成,适合扩增制备高拷贝和大型质粒。
3. 携带?-半乳糖苷酶?片段,如果外源基因携带此酶的?片段,则可以进行蓝
白斑筛选重组子。
4. 内源核酸酶 EndA1 缺失,提取的质粒 DNA 残留 DNase 少,质量高。
5. 基于 RecA 的三套重组系统均缺失,质粒在复制过程发生重组、丢失和串
环的可能性降低,使得插入片段稳定。
6. EcoK 限制功能缺失(hsdR-),不能酶切在 EcoK 位点没有甲基化的 DNA,
但其修饰功能完整,故可以用 EcoK 位点非甲基化质粒通过本菌株制备其
对应的甲基化质粒,后者可用来转化限制 EcoK 功能正常(基因型为
hsdR+)的 K-12 系的大肠杆菌。
7. 本菌株对常见抗菌素没有抗性。
运输及保存 低温运输,-80℃保存,有效期一年。
自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等
使用方法
质粒转化大肠杆菌DH5α菌种的方法有很多,如电转化、化学转化等。
根据实验方法的不同,用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方
法。
1. 挑取酵母单菌落,接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中,
30℃,250-300 r/min 培养过夜;
2. 取 100-500 μL (≤1:100)的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的
200 mL 三角摇瓶中,28~30℃,250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时),
至 OD600 达到 1.3~1.5;
3. 将细胞培养物于 4℃,1500g 离心 5 分钟,用 50 mL 的冰预冷的无菌水
将菌体沉淀重悬;
4. 按步骤 3 离心,用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬;
5. 按步骤 3 离心,用 2-5 mL,1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬;
6. 按步骤 3 离心,用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬,
其终体积约为 240 uL;
7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中,与 80 μL 的上
述步骤 6 所得的菌体混匀,转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中;
8. 将电转化杯冰浴 5 分钟;
9. 根据电转化仪提供的资料,参考其他文献及多次摸索,确定合适的电压、
电流、电容等参数,按优化的参数,进行电击(推荐:电压 1.5 kV ;电
容 25 μF ;电阻 200 Ω;电击时间为 4 ~10 msec)。
10. 电击完毕后,马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀,转
至 1.5 mL 的 EP 管中,置于 30℃摇床低速培养 1 小时;
11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上,每 200~600 μL 涂布一块平板;
12. 将平板置于 30℃倒置培养,直至单个菌落出现(3-4 天)。