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pGEM-3Zf(+)体外转录质粒
基本信息
启动子: Lac/lac
复制子: ColE1 ori,F1 ori
质粒分类: 大肠杆菌载体;克隆质粒
质粒大小: 3197bp
质粒标签: LacZ
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
5'测序引物: M13R:CAGGAAACAGCTATGACC
3'测序引物: M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
备注: 蓝白斑筛选
质粒简介
pGEM-3Zf(+)可作为一般克隆载体和高效率RNA体外合成的模板,此载体含SP6和T7RNA聚合酶启动子,还含有lacZct-肽基因及单克隆位点,可在含IPTG和X Gal的平板上对重组子进行蓝/白筛选。此载体含有丝状噬菌体fl的复制起点,可诱导产生单链DNA。pGEM 3Zf(+)表示其fl是正方向的,pGEM-3Zf(+)特征图谱见图。
质粒图谱
pGEM-3Zf(+)体外转录质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pGEM-3Zf(+)体外转录质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。