pGEX-4T-1大肠表达质粒

基本信息

别名: pGEX4T-1，pGEX4T1

启动子: Tac/laco promoter

复制子: ColE1 ori

质粒分类: 大肠杆菌载体；pGEX系列表达质粒

质粒大小: 4969bp

质粒标签: N-GST, N-thrombin

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

克隆菌株: 大肠杆菌DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 大肠杆菌BL21 DE3

培养条件: 37℃，有氧，LB

诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物

5'测序引物: pGEX5: GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG

3'测序引物: pGEX3: CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG

备注: 可用GST亲和柱纯化重组蛋白

质粒简介

         pGEX-4T-1质粒是一个大肠杆菌表达载体，Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达，LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达，防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割，再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。

质粒图谱

pGEX-4T-1大肠表达质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pGEX-4T-1大肠表达质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。