pVAX1哺乳表达质粒

基本信息

启动子: CMV promoter

复制子: pUC ori

终止子: BGH poly（A）signal

质粒分类: 哺乳细胞载体;蛋白过表达质粒

质粒大小: 2999bp

原核抗性: 卡那霉素Kan

克隆菌株: 大肠杆菌DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 哺乳细胞293T

培养条件: 37℃，5%CO2

诱导方式: 无需诱导

5'测序引物: CMV-F: CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG

3'测序引物: BGH-R: TAGAAGGCACAGTCGAGG

备注: 真核表达

质粒简介

本载体的特征是允许在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行高拷贝复制和在哺乳动物(mammal;mammalian)细胞中高水平的瞬时表达蛋白。载体包含下列元素：

       •人巨细胞病毒（CMV）立即早期启动子，使得本载体可以在大部分的哺乳动物(mammal;mammalian)细胞中进行高水平基因表达

       •牛生长激素（BGH）多聚腺苷酸化信号能够保证高效的转录终止和mRNA的poly A结构。

       •在大肠杆菌(Escherichia coli)中是用卡那抗性进行修改载体筛选。

       •质粒pVAX1/lacZ是用来作为细胞系目的基因转染和表达的阳性对照。

质粒图谱

pVAX1哺乳表达质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pVAX1哺乳表达质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。