产品详情
pEYFP-Mem细胞膜定位质粒
基本信息
启动子: CMV
复制子: pUC ori,f1 ori
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 哺乳细胞,荧光蛋白报告载体
质粒大小: 4793bp
原核抗性: Kan
筛选标记: Neo
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃,有氧 LB
表达宿主: 哺乳细胞
诱导方式: 无须诱导,瞬时表达
5'测序引物: 根据序列设计引物
3'测序引物: 根据序列设计引物
质粒简介
pEYFP-Mem encodes a fusion protein consisting of the N-terminal 20 amino acids of neuromodulin,also called GAP-43, and a yellow-green fluorescent variant of the enhanced green fluorescent protein (EGFP). The neuromodulin fragment contains a signal for posttranslational palmitoylation of cysteines 3 and 4 that targets EYFP to membranes. The EYFP gene contains four amino acid substitutions previously published as GFP-10C. The fluorescence excitation maximum of EYFP is 513 nm, and the emission maximum is 527 nm (in the yellow-green region).
质粒图谱
pEYFP-Mem细胞膜定位质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pEYFP-Mem细胞膜定位质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。