产品详情
pCHO1.0哺乳抗体质粒
基本信息
启动子: CMV/EF1
复制子: ori
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 哺乳细胞,抗体表达载体
质粒大小: 12988bp
原核抗性: 卡那霉素Kan
筛选标记: 嘌呤霉素Puro
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
表达宿主: 哺乳细胞
备注: 拷贝数较低,构建时需要大提质粒
质粒简介
pCHO 1.0载体是由ProBioGen AG设计,能够表达一个基因或利用载体上面的杂交CMV启动子共表达2个目的基因。该载体包含有二氢叶酸还原酶(DHFR)选择性标记和嘌呤霉素(puromycin)抗性基因,可以同时使用MTX和嘌呤霉素进行筛选。
质粒图谱
pCHO1.0哺乳抗体质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pCHO1.0哺乳抗体质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。