产品详情
pLVX-Tight-Puro慢病毒表达质粒
基本信息
启动子: PGK ,tight TRE
复制子: pUC ori
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 病毒系列,慢病毒克隆载体
质粒大小: 7790bp
原核抗性: Amp
筛选标记: Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37℃,有氧 LB
表达宿主: 哺乳细胞
诱导方式: 四环素诱导
5'测序引物: 根据序列设计引物
3'测序引物: 根据序列设计引物
质粒简介
pLVX紧PURO是四环素(TET)诱导,慢病毒表达载体,表达了ptight控制下一个感兴趣的基因,改良的四环素反应启动子。ptight包含一个改进的最小的CMV启动子和一个36 bp的调控序列包含19 bp的直接重复序列七四环素。这个载体是设计用来与我们慢XTM Tet-on®先进Tet-Off®先进的诱导表达系统(CAT。632162号,632163)。
pLVX紧PURO包含所有用于生产的必要的复制能力的慢病毒病毒处理的元素,以及元素来提高病毒滴度,外源基因的表达水平,和整体的向量函数。土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)促进RNA处理事件和提高核口病毒和转基因RNA,导致增加病毒滴度包装细胞,和你感兴趣的基因在靶细胞中表达增强。此外,载体包括Rev应答元件(RRE),从而进一步增加病毒滴度提高拼接的病毒RNA转运出细胞核。pLVX紧PURO还包含一个中央聚嘌呤道(CPPT)元素,增加了病毒基因组的核进口感染靶细胞的过程中,从而提高了矢量化的和更有效的途径。
质粒图谱
pLVX-Tight-Puro慢病毒表达质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pLVX-Tight-Puro慢病毒表达质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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