pPICZA毕赤酵母质粒

基本信息

启动子: AOX1，EM7

复制子: ori

终止子: CYC1

质粒分类: 酵母系列，毕赤酵母表达载体

质粒大小: 3329bp

质粒标签: C-Myc, C-His

原核抗性: Zeo

筛选标记: Zeo

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧 LB

表达宿主: 酵母细胞

诱导方式: 甲醇诱导

5'测序引物: AOX5:GACTGGTTCCAATTGACAAGC

3'测序引物: AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT

质粒简介

     pPICZ A，B和C是3.3 kb的毕赤酵母蛋白载体。表达的重组蛋白是融合蛋白，含有一个C-端多肽，多太重含c-myc和C-His标签。载体能够在毕赤酵母中利用甲醇诱导的高水平的表达目的蛋白，并且可以用在任何毕赤酵母中，包括X33，GS115菌株，SMD1168H，KM71H。

质粒图谱

pPICZA毕赤酵母质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pPICZA毕赤酵母质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。