pBE2R枯草分泌质粒

基本信息

启动子: P43 promoter

复制子: ori

质粒分类: 枯草杆菌质粒；枯草游离质粒；枯草分泌质粒

质粒大小: 7014bp

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

克隆菌株: 大肠杆菌Stbl3

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 枯草芽孢杆菌

5'测序引物: 根据序列设计引物

3'测序引物: 根据序列设计引物

质粒简介

        pBE2R穿梭表达载体是以pBE2为根本骨架，引入来自pWB980质粒的P43强启动子，并在其下流引入嗜碱芽孢杆菌碱性卵白酶信号肽和前肽构建而成。质粒拷贝数测定显示，pBE2R在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌每一个细胞中约含有1个拷贝。质粒稳固性试验显示：该质粒在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中各传30代而不产生丧失，可以在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中稳固存在。

质粒图谱

pBE2R枯草分泌质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pBE2R枯草分泌质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。