pFastBacHTA昆虫胞内质粒

基本信息

复制子: pUC ori，F1 ori

终止子: SV40 poly(A) signal

质粒分类: 广宿主系列，昆虫细胞载体

质粒大小: 4856bp

原核抗性: Amp

筛选标记: Gen

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧 LB

表达宿主: 昆虫细胞

诱导方式: 无须诱导，瞬时表达

5'测序引物: pFastbac-F: TATTCCGGATTATTCATACC

3'测序引物: pFastBac-R: ACAAATGTGGTATGGCTGA

质粒简介

      Bac-to-BacHT Vector Kit 设计用于在大肠杆菌 (E. coli) 中生成杆状病毒载体后，在 Sf9、Sf21 或 High Five 细胞中表达和纯化带组氨酸标签的重组蛋白。 pFastBacHT 载体具有以下特点：1. 用于表达蛋白质的多角体强启动子 2. 用于简化克隆的三个读码框 3.用于轻松纯化重组融合蛋白的 N-端 6xHis 标签 4.用于在蛋白质纯化后去除组氨酸标签的 TEV 蛋白酶切割位点  

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质粒图谱

pFastBacHTA昆虫胞内质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pFastBacHTA昆虫胞内质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。