pFastBac-GST-C昆虫胞内质粒

基本信息

启动子: Polyhedrin

复制子: pUC ori，F1 ori

终止子: SV40 poly(A) signal

质粒分类: 昆虫细胞载体；杆状病毒组成型表达质粒

质粒大小: 5468bp

质粒标签: N-3C，N-GST

原核抗性: 氨苄青霉素Ampicillin

筛选标记: 庆大霉素Gentamicin

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 昆虫细胞

诱导方式: 组成型表达，无需诱导

5'测序引物: pFastbac-F: TATTCCGGATTATTCATACC

3'测序引物: pFastBac-R: ACAAATGTGGTATGGCTGA

备注: 可表达GST融合蛋白

质粒简介

        The Bac-to-Bac® Baculovirus Expression System provides a rapid and efficient method to generate recombinant baculoviruses (Ciccarone et al., 1997). This method was developed by researchers at Monsanto, and is based on site-specific transposition of an expression cassette into a baculovirus shuttle vector (bacmid) propagated in E. coli (Luckow et al., 1993). The major components of the Bac-to-Bac® Baculovirus Expression System include:

        • A choice of pFastBac™ donor plasmids that allow generation of an expression construct containing the gene of interest where expression of the gene of interest is controlled by a baculovirus-specific promoter.

        • An E. coli host strain, DH10Bac™, that contains a baculovirus shuttle vector (bacmid) and a helper plasmid, and allows generation of a recombinant bacmid following transposition of the pFastBac™ expression construct..    .

质粒图谱

pFastBac-GST-C昆虫胞内质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pFastBac-GST-C昆虫胞内质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。