pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒

基本信息

别名: pHH-43

复制子: colE1 ori

质粒分类: 大肠杆菌菌蜕制备质粒

原核抗性: 氯霉素Chloramphenicol

克隆菌株: 大肠杆菌DH5α

培养条件: 30℃，有氧，LB

质粒简介

         pHH43是构建有φX174噬菌体裂解蛋白的温控型表达质粒。该质粒可以转化入大肠杆菌DH5α中,诱导细菌裂解制备大肠杆菌DH5α菌蜕。在大肠杆菌杆菌上面打孔制造菌影，那段基因的酶切位点是kpn i和EcoR V，由于含有E裂解基因，超过38度就可以引发，所以培养最好30度左右。

质粒图谱

pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。