产品详情
pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒
基本信息
别名: pHH-43
复制子: colE1 ori
质粒分类: 大肠杆菌菌蜕制备质粒
原核抗性: 氯霉素Chloramphenicol
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 30℃,有氧,LB
质粒简介
pHH43是构建有φX174噬菌体裂解蛋白的温控型表达质粒。该质粒可以转化入大肠杆菌DH5α中,诱导细菌裂解制备大肠杆菌DH5α菌蜕。在大肠杆菌杆菌上面打孔制造菌影,那段基因的酶切位点是kpn i和EcoR V,由于含有E裂解基因,超过38度就可以引发,所以培养最好30度左右。
质粒图谱
pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。