产品详情
沉淀法miRNA分离试剂盒
产品及特点
microRNA(miRNA)和 RNA 干扰研究是当今分子生物学研究的一大热点,但快速分离和纯化相关的小 RNA 十分棘手,是目前研究 miRNA 的主要技术障碍之一。目前国外相关产品寥寥无几,并且基本采用先提总 RNA 再富集其中的小 RNA 的两步法策略,国内相关产品更是一片空白。天泽基因为满足广大用户的需求,开发了具有自主知识产权的本产品,它具有下列特点:
1. 从总 RNA 中直接分离纯化小 RNA,不需要使用离心吸附柱。得到的小RNA 长度大部分在 200 nt 以下,包括 5S RNA、tRNA、 miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA 和 snRNA 等。
2. 操作简单快速,整个过程只需要约 30 分钟。
3. 小 RNA 纯净,OD260/280 一般都在 1.9 以上。
4. 可用于 RT-PCR、miRNA 标记、microarray 等后续实验。
5. 此方法能去除 90%左右的大 RNA,但会有少量残留大 RNA,如果需要纯度更高,可以选择 PAGE 回收法。
规格及成分 成 份 50 次包装
溶液 A 5 mL 溶液 B 10 mL 溶液 C 50 mL RNase-free 水 10 mL 使用手册 1 份
运输及保存 常温运输.4℃保存,有效期一年。
自备试剂 RNase-free 塑料离心管。
使用方法
1. 在纯化好的 100 uL 总 RNA(含大 RNA 和小 RNA)中,加入 50 uL溶液 A,振荡 30 秒混匀。如果 RNA 样品体积不足 100 uL,可以用RNase-free 水补足,如果体积超过 100 uL,可以用本公司核酸浓缩剂浓缩到 100 uL。
2. 室温 12000-15000 g 离心 30 分钟。小 RNA 在上清中,大 RNA 在沉淀中。注意:离心时间不能短于 30 分钟,否则大 RNA 沉淀不充分。
3. 小心将上清液转移到干净的 1.5 mL RNase-free 塑料离心管中。留下的沉淀可以用75%乙醇洗涤后做大 RNA 电泳对照用。
4. 在上清液中加入 200 uL 溶液 B,振荡 30 秒混匀。
5. 室温 12000-15000 g 离心 10 分钟,小心弃上清。由于溶液 B 中有惰性的助沉剂,所以得到的小 RNA 沉淀肉眼可见。
6. 加入 1 mL 溶液 C,震荡数秒。
7. 室温 12000-15000 g 离心 10 分钟,小心弃上清。
8. 短暂离心数秒,小心吸弃残留液体(约 50 uL 左右)。
9. 在沉淀中(含小 RNA)加入 30-100 uL RNase-free 水,吹打溶解即得小 RNA 溶液。注意:不能只吹打管底部分,还需要吹打整个离心管管壁的离心面部分,因为上面也有小 RNA 沉淀。
10. 好先 PAGE-银染检测小 RNA 纯度再使用。