产品详情
TdT加尾法DNA探针标记试剂盒
产品及特点本产品是基于 TdT 末端转移酶能够在 DNA 的 3’端添加 dNTP 尾巴的 原理而设计,该反应的示意图如下:
本产品是在上述原理的基础上开发的,具有下列特点:
1. 快速,15 分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链 DNA 和 DNA Oligo 标记,还可用于 3’突出的双链 DNA 标记,但后者标记效率稍低。
3. 可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高辛标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高辛标记核苷酸三种 选择。
5. 同时提供非标记的 dATP,用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺 入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度 RNA 检测)、小 RNA Northern、Southern Blot (不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
规格及成分 成 份 编 号 十孔盒包装
TdT 缓冲液,5× 90605a 20 uL
TdT 末端转移酶(10 U/uL) 90605b 10 uL
dATP,2 mM 90605c 5 uL
标记核苷酸 见注 (A、B、C 不同,见注)
超纯水 100935 1 mL
使用手册 90605sc 1 份
注:A 型用于自选标记,用户需自备标记核苷酸,本产品不提供标记核苷酸;B 型提供 5 uL Biotin-11-dUTP(CAT#:100920);C 型提供含 5
运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年
自备试剂 DNA 模板
使用方法1. 在 0.2 mL 微量离心管中按下表设置一个 20 uL 体系的标记反应(如果 需要标记更多探针,请增加标记体积而不要增加探针 DNA 的浓度):
2. 37℃反应 15 分钟,延长到 30 分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在, 一般可以加尾 3-5 个 Biotin 或 DIG 标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制 延长);如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸 dATP(其他 dNTP 也可,只是本试剂盒只提供 dATP 而已),每条探针上可加上约 100 个核苷酸,平均含 5 个标记核苷酸
3. 70℃ 10 分钟灭活 TdT 酶。
4. 如果需要,可以 PAGE 电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率, 带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记,探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非 同位素标记的探针,请不要酚/氯仿抽提,因为非同位素标记物一般会使 探针 DNA 进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以 1-8 ng/uL 的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双 链 DNA,加入前还需热变性)。如果不立即使用,非同位素标记的探针 DNA 可-20℃长期放置一年,同位素标记的探针 DNA 不能放置。