产品详情
填入法DNA探针生物素末端标记试剂盒
原理及特点本产品是基于 DNA 聚合酶能够在 DNA 粘性末端的 3’凹端掺入 dNTP 的原理而设计,该反应的示意图如下: 本产品是在上述原理的基础上开发的,具有下列特点:
1. 快速,15 分钟即可完成标记反应。
2. 可用于任何 3’凹端的 DNA 片段。
3. 可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高辛标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高辛标记核苷酸三种 选择。
5. 同时提供非标记的 dNTP,用户可以根据粘性末端序列使用。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度 RNA 检测)、小 RNA Northern、Southern Blot (不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
7. 本产品足够 5 次 20uL 体系的标记反应。
8. 本产品仅供科研使用。
规格及成分 成 份 编 号 十孔盒包装
Klenow DNA 聚合酶 131235a 10 uL(红盖)
10×Klenow DNA 聚合酶缓冲液 131235b 10 uL(白盖)
dATP 溶液,2.5mM 130912 10 uL(黄盖)
dTTP 溶液,2.5mM 130913 10 uL(绿盖)
dGTP 溶液,2.5mM 130914 10 uL(蓝盖)
dCTP 溶液,2.5mM 130915 10 uL(紫盖)
Biotin-11-dUTP 溶液 120653b 10uL(本色盖仅 B 型)
DIG-11-dUTP 溶液 120653c 10uL(本色盖仅 C 型)
超纯水 100935 1 mL(蓝盖)
使用手册 120653sc 1 份
运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年
自备试剂 DNA 模板
使用方法1. 在 0.2 mL 微量离心管中按下表设置一个 20uL 体系的标记反应(如果需 要标记更多探针,请增加标记体积而不要增加探针 DNA 的浓度): 成份 用量 待标记 DNA(3’凹陷) 100-200 pmol Klenow DNA 聚合酶缓冲液,10× 2 uL 自备标记核苷酸(A 型) 或 Biotin-11-dUTP 溶液(B 型) 或 DIG-11-dUTP 溶液(C 型) 1 uL 与标记核苷酸不相同的三种非标记 核苷酸,2.5mM(对 B 型和 C 型,标 记的是 dUTP,相当于 dTTP,因此 应该加 dATP、dCTP 和 dGTP) 各 1uL,共 3uL Klenow DNA 聚合酶 1 uL 超纯水 补到 20 uL
2. 37℃反应 30 分钟。
3. 70℃ 10 分钟灭活 Klenow DNA 聚合酶。
4. 如果需要,可以用斑点杂交法检测标记效率(本产品不含相关试剂)。
5. 如果是非同位素标记,探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非 同位素标记的探针,请不要酚/氯仿抽提,因为非同位素标记物一般会使 探针 DNA 进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以 1-8 ng/uL 的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双 链 DNA,加入前还需热变性)。如果不立即使用,非同位素标记的探针 DNA 可-20℃长期放置一年,同位素标记的探针 DNA 不能放置。