产品详情
粗提酵母tRNA溶液A,5mg/mL
产品及特点本产品分 A 和 B 两个纯度级别,浓度均为 5mg/mL。A 是酵母 tRNA 粗提液, 用作制备更高纯度(如分子生物级)酵母 tRNA 的原材料或斑点杂交液添加成分。 B 是精提液,是经过本公司柱式 RNAclean 纯化的分子生物学级别的酵母 tRNA 溶 液,不含蛋白质和 DNA 污染,OD260/OD280 在 1.9 左右,可直接用作微量 RNA 提取和回收的助沉剂,也可以用作原位杂交、Northern 杂交的封堵剂,对于探针 为 RNA 的杂交试验尤其适用。
规格及成分 70904A 包装
成 份 编 号 塑料袋包装
tRNA 溶液粗提液 70904a 1.5 mL
使用手册 70904sc 1 份
70904B 包装
成 份 编 号 塑料袋包装
tRNA 溶液精提液 70904b 或 1.5 mL
使用手册 70904sc 1 份
运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年
自备试剂 根据情况
使用方法 一:以 tRNA 粗提液(70904a)为材料,酚法制备 tRNA 精提液(70904b)
1. 在 1 倍体积的 tRNA 粗提液中加入一倍体积的自备 Tris 饱和酚,振荡混匀后 12000-15000 g 离心 3 分钟得上清。
2. 在上清中再加入一倍体积的自备 Tris 饱和酚和 0.2 倍体积自备的氯仿,振荡 混匀后 12000-15000 g 离心 3 分钟得上清。
3. 重复此步直到酚相和水相之间没有白膜出现。一般需要 2-4 次抽提。
4. 在上清中加入 0.1 倍体积的自备 3M NaAc(pH5.2)和 2 倍体积的自备无水 乙醇,振荡混匀。
5. 12000-15000 g 离心 15 分钟以上,小心移弃上清。
6. 用 1mL 自备 75%乙醇洗一次(即加入 1mL 75%乙醇,振荡混匀后 12000-15000 g 离心 5 分钟,小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒,小心移弃残留液体,所得沉淀即是精提的酵母 tRNA,可以溶 解在自备的 DEPC 水中,UV 测定其浓度,然后直接用于各种分子生物学实验。 注意:tRNA 比较短,又是单链,所以电泳时结合 EB 等染料的能力很弱,测 定其浓度时好不要使用电泳比较法,而要使用分光光度法。
注意:此法得率较高,但缺点是不能去除部分多糖污染,因为多糖也能在醇沉淀时 沉淀下来。如果后得到的溶液带颜色,则需要用本公司柱式 RNAclean 精提,详 细过程见该产品使用手册。
二:tRNA 精提液(70904b)作为核酸助沉剂
1. 在核酸(DNA 或/和 RNA)溶液中,加入适当浓度的盐离子,盐离子不同其终浓 度也不相同,具体如下: 盐 终浓度 NH4OAc (醋酸铵) 0.5 M NaCl (氯化钠) 0.25 M NaOAc (醋酸钠) 0.3 M 2. 加入本产品使其终浓度为 20 ug/mL,混合均匀。
3. 加入两倍体积的乙醇,混合均匀。
4. 冰上放置 15 分钟。
5. 12000-15000 g 离心 15 分钟以上,小心移弃上清。
6. 用 1mL 75%乙醇洗一次(即加入 1mL 75%乙醇,振荡混匀后 12000-15000 g 离心 5 分钟,小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒,小心移弃残留液体。
8. 将沉淀溶于适当缓冲液中待用。
注:由于 tRNA 是多聚核苷酸激酶和末端转移酶的底物,因此如果回收的 DNA 或 RNA 要用于此类反应,就不能使用 tRNA 作为助沉剂。如果回收的 RNA 要用于 RT-PCR,使用 tRNA 可能会对反应的特异性产生干扰。
二:tRNA 精提液(70904a 或 70904b)作为杂交封堵剂
tRNA 粗提液可以作为菌斑杂交液的封堵成分,tRNA 精提液可以作为原位杂 交液、Northern 杂交液和 RNA 斑点杂交液的封堵剂,也可以作为 Southern 杂 交液和 DNA 斑点杂交液的封堵剂,但不适于作为菌斑杂交。其在杂交液或预杂交 液中的终浓度为 100ug/mL。如果使用 RNA 探针,好使用 tRNA 精提液做封堵 剂,以保护 RNA 探针。