产品详情
2X 探针法qPCR Mix
产品及特点本产品是基于荧光探针检测的即用型 PCR 试剂盒,可以对靶片段进行实时定量 PCR 分(quantitative PCR、qPCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、热启动 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 稳定剂、dNTPs、MgCl2和稳定剂等所有实时定量 PCR 所需要的成分,用户只需加入基因组 DNA 或 cDNA 模板、引物和探针即可进行探针法实时定量 PCR 反应,具有广泛的用途。本产品具有下列特点:
1. 以 2×Mix 提供,用户只需准备模板、引物、探针和 ROX 染料(取决于 qPCR 仪器)即可以进行探针法实时定量 PCR 实验,非常方便快捷,降低了操作误差。
2. 各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。灵敏度高时可以达到 50 拷贝/反应(跟模板质量,引物设计等相关)。
3. 既可用于 TaqMan 探针 qPCR,也可以是分子信标(molecular beacon)探针 qPCR。
4. 灵敏度和专一性比染料法荧光定量 PCR 更高。
5. 可用于基因表达分析、SNP 分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。
6. 本产品只能用于科研,1mL 足够 100 次 20uL 体系的探针法 qPCR 反应。500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、Corbett RotorGene 3000。
2. 放入荧光 PCR 仪中进行扩增, 下表的扩增参数仅供参考,一定需要根据靶分子长度,引物和探针的 Tm 值、标记染料的种类等进行调节。一般选择三步法 PCR:
规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装 十孔盒包装
2×探针法 qPCR Mix 190303 1 mL(棕色盖) 1 mL(棕色盖)×10
使用手册 190303sc 1 份 1 份
步骤 反应参数 备注
预变性 94℃ 2 分钟
PCR(35-45 次循环)
94℃ 15 秒
靶分子 长 度 最 好 在
80-200bp
55-65℃ 15-30 秒
在此步采集荧光信号,通
道根据标记染料决定
72℃ 30 秒
如果引物 Tm 值接近 60℃,也可以选择两步法 PCR:
步骤 反应参数 备注
预变性 94℃ 2 分钟
PCR(35-45 次循环)
94℃ 15 秒
靶分子 长 度 最 好 在
80-200bp
60℃ 60 秒
在此步采集荧光信号,通
道根据标记染料决定
3. 数据处理
如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性。一般情况下,阴性对照 Ct 大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性