产品详情
大肠杆菌TOP10化学感受态细胞
产品及特点本产品是采用大肠杆菌 TOP10 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可 用于 DNA 的化学转化。该菌株是一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重 级缺陷的抑制型株,其φ80lacZΔM15 基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨 基端实现α 互补,可用于蓝白斑筛选。使用 pUC19 质粒检测,转化效率可达 108。本感受态细胞具有链霉素抗性。
菌株的基因型:F - mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL(Str r ) endA1 nupG
规格及成分 成分 编号 包装
本产品 80806 0.1mL×10
使用手册 1 份
运输及保存 干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl,可以根据实际情况分装使用。以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(根据实际情况加入适量的 DNA,通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 45 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃摇床,150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的 SOC 或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养 12-16 小时。
注意:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的 DNA 总量较少,可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000 rpm,2 分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。