产品详情
包涵体中量纯化试剂盒
产品及特点本产品是基因包涵体微量纯化试剂盒(CAT#:90508)的中量提取升 级产品,用于中量,快速的提取高质量的包涵体。它具有下列特点:
1. 中量提取,一次可以处理 30-50 mL 的菌液,一次中量提取相当于 10-20 次 微量提取。
2. 操作简单快速,整个过程只要四十分钟左右。
3. 大规模提取,可以在 15-50 mL 离心管中完成。
4. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份,使重组蛋白所占 比重达到 60%以上。
5. 细胞裂解通过非离子洗涤剂的化学裂解法,裂解更加温和。 6. 得到的包涵体可以用于重折叠。
规格及成分 成 份 编 号 5 次大纸盒包装
包涵体中量纯化溶液 A LM90509A 25 mL
包涵体中量纯化溶液 B LM90509B 250 mL
包涵体溶解液 LM90509C 25 mL
溶菌酶 LM100406 3 g
Benzonase(1U/uL) (Cat#:101001) 101001 125 uL
使用手册 90509sc 1 份
运输及保存 常温运输及保存,但溶菌酶和 Benzonase 需要低温运输,-20℃保存,有效期一
年。 自备试剂 无
使用方法 准备工作:
将 3 g 溶菌酶全部加入到 25 mL 溶液 A 中溶解,然后根据每次的需要量(一次大量提取需要
3. 加入 5 mL 含溶菌酶的溶液 A 重悬细胞。
4. 室温放置 10-20 分钟裂解细菌,其间可以用手轻弹离心管混匀。
5. -20℃冷冻至凝固。凝固有利于裂解细菌,所以一定要凝固到细菌溶液变成固体。
6. 室温水浴解冻。如果裂解充分,细菌释放出的 DNA 将使裂解物十分粘稠。如果不粘稠,说明裂解不充分,需要重复 3-6 步,否则完整细菌将和包涵体一起沉淀,影响包涵体的纯度。如有条件好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
7. 加入 25 uL 的 Benzonase (1U/uL),脱色摇床上摇晃直到裂解液不再粘稠,一般需要 30 分钟左右(检查方式是将裂解物倾倒转移到另一离心管中,在转移过程中看其是否粘稠)。
8. 5,000-7,000 rpm 4℃离心 5 分钟,小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白,可以保留作为 SDS-PAGE 对照样品。
9. 将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在 25 mL 的溶液 B 中,轻柔混匀后室温放置 5 分钟。
10. 5,000-7,000 rpm 4℃离心 10 分钟,小心收集上清,可以作为包涵体一次洗涤的对照样品。
11. 将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在 25mL 的溶液 B 中,轻柔混匀后室温放置 5 分钟。
12. 5,000-7,000 rpm 4℃离心 10 分钟,小心收集上清作为包涵体第二次洗涤的对照样品。一般洗涤两次就能够得到足够纯净的包涵体,如果需要更多洗涤,需要用户单独购买包涵体洗涤液(溶液 B)。
13. 得到的沉淀即为包涵体,可以长期放置在冰箱待用或直接进入包涵体的溶解
步骤。 二.包涵体的溶解:
1. 在包涵体沉淀中加入 5 mL 包涵体溶解液,用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果低温放置,包涵体溶解液会产生沉淀,必须 45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2. 室温放置 1 小时使蛋白质充分溶解。
3. 20000g 4℃离心 20 分钟,小心收集上清,保留不溶性沉淀。注意:检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE 检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有,说明包涵体没有完全溶解,需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4. 得到的蛋白质溶液可以用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的佳复性条件,所以本公司不能提供统一的复性溶液,需要用户自己摸索。注意:包涵体纯化过程中引入了溶菌酶、DNase 和 RNase 等外源蛋白质,在SDS-PAGE 分析时可能有额外条带出现。