产品详情
蛋白胶中量回收试剂盒
产品及特点十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)不仅可用于检测蛋 白质的相对分子质量,而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一,随着蛋白 质技术的微量化,有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、 氨基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的微量蛋 白胶回收法,它具有下列特点: 1. 简单,不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。
2. 适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶。
3. 回收率一般在 50-90%之间(跟蛋白质大小,洗脱时间相关)。
4. 跟后续的实验兼容,包括 2-D 电泳、质谱测序等。
规格及成分 成 份 编 号 大扁盒包装
蛋白胶中量纯化溶液 A LM90403a 5 mL
蛋白胶中量纯化溶液 B LM90403b 50 mL
20mL 塑料注射器 LM90403c 5 只
使用手册 LM90403sc 1 份
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂 无
使用方法
1. 按常规方法进行变性(SDS-PAGE)或非变性蛋白电泳。
2. 切取含目的蛋白的胶(尽可能地把多余的胶切除,否则会影响回收效率)。 注意:固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建议把样品分多孔上样,电 泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色,然后将此胶条放回到在整 体胶中原来的位置,通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区 域,并切下此区域的胶进行回收。
3. 将切下的胶块转移到 1.5 mL 塑料离心管中。
4. 用研磨杵充分将胶块压磨成尽可能细小的碎片。
5. 加入 200 uL 溶液 A,4℃摇晃洗脱至少 2-16 小时(过夜)。此时好将 溶液 B 放在冰箱预冷。
6. 10,000 g 离心 10 分钟,转移上清到新的离心管中,注意不要吸取碎胶。
7. 加入 5 倍体积的预冷的溶液 B,摇晃混匀。
8. -20℃放置至少 10-30 分钟。
9. 室温 12,000 g 离心 5-20 分钟,弃上清。
10.室温充分晾干,得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适 当的缓冲液中,可用于后续实验(2-D 电泳、质谱测序等)。