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高产全血基因组DNA提取试剂盒
高产全血基因组DNA提取试剂盒采用独特的裂解液,可快速可靠的从抗凝全血样本中纯化出高纯度的DNA,大限度的去除蛋白、色素、脂类等杂质污染。应用本试剂盒获取的DNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.6-1.9。应用本试剂盒提取的DNA可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern杂交等多种分子生物学实验。 | ||
组分 | ||
组分名称数量红细胞裂解液50 mlgDNA LB16 mlgDNA BB240 mlWashing Buffer(已含乙醇)55 ml蛋白酶K(20mg/ml)1 mlDNA Elution Buffer10 ml吸附柱50套 | ||
注意事项 | ||
(1) 首本试剂盒中的Washing Buffer中已经加乙醇,无需单独添加。 (2)gDNA LB1,储存时可能会有白色结晶沉淀,放置于56℃水浴锅溶解后,不影响使用效果。 (3)蛋白酶K(20 mg/ml)长期保存请储存于-20℃,短期室温保存(6个月),其它组分储存于室温。 | ||
储存 | ||
室温避光保存,可储存两年。 | ||
实例 | ||
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图:应用新海基因高产全血基因组DNA提取试剂盒(H)、A公司、T公司和Q公司的血液提取试剂盒分别按其说明书提取人外周血样品的DNA,提取的血液量分别为250μl和500μl。 | ||
使用方法 | ||
(1)样本处理(1.5 ml EP管中处理) 抗凝全血:吸取200~500 μl抗凝全血加入到800 ul红细胞裂解液中上下颠倒混合均匀,13000rpm离心30s,去上清,留细胞沉淀,用50μl水重悬细胞沉淀。 淋巴细胞分离液分离出的白细胞:直接吸取50μl白细胞。 有核红细胞抗凝全血(禽血):吸取5 μl抗凝全血加入到50 μl无菌水中,漩涡震荡混合均匀。 (2)向上述准备好的样品溶液中加入100 μl gDNA LB1和20 μl蛋白酶K漩涡混合均匀10s,56℃水浴锅中消化5min。 (3)加入700 μl gDNA BB2漩涡震荡混合均匀1min,13000rpm离心3min。 (4)将上清液倒入到吸附柱中,13000rpm离心1min。 (5)倒掉废液。向吸附柱中加入500 μl Washing Buffer,13000rpm离心15s。重复此步骤一次。 (6)将吸附柱重新放回离心机,13000rpm空离心2min,将残留的乙醇彻底甩干。 (7)将吸附柱芯放入到1.5ml收集管中,向吸附柱芯中加入60~150 μl DNA Elution Buffer(DNA Elution Buffer预热到65℃将提高洗脱产量),室温放置1min,13,000rpm离心1min,洗脱液即为基因组DNA,冷冻保存。 |