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SUMO蛋白酶
SUMO蛋白酶,也称为UIP蛋白酶,是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶,来源于酵母编码的MIP1基因,其特异性识别UBL蛋白的三级结构-SUMO(Small Ubiquitin-Like Modifier)。SUMO蛋白酶能够识别完整的SUMO序列,并依赖正确的蛋白质构象,仅有完整的序列,没有正确的结构,SUMO酶是不能对目标蛋白进行切割的。因此,该酶是目前切割特异性好的蛋白酶,可在较广泛的作用温度和PH范围(pH7-9)内发挥作用,切割的佳温度为30°C。SUMO蛋白酶的识别序列如下,切割位点位于QIGG之后 SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG 本公司生产的SUMO蛋白酶含有双His标签,酶切后,可通过Ni-NTA Resin亲和纯化,很容易地将SUMO去除。双His标签保证了,SUMO蛋白酶高亲和力的结合Ni-NTA,以大限度的去除SUMO蛋白酶。该SUMO蛋白酶分子量约26kD,比活>10E5/mg。 | ||
组分 | ||
组分名称数量SUMO 蛋白酶(10 U/μl)100 μl10XSUMO Buffer1 ml ×33 M NaCl0.5 ml | ||
单位定义 | ||
在1XSUMO Protease Buffer-Salt (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中,30°C反应1h,剪切>85%的2 μg对照底物所需要的酶量定义为一个活性单位。 | ||
应用 | ||
融合蛋白标签剪切去除。 | ||
储存 | ||
SUMO蛋白酶置于-70°C可保存2年;-20°C可保存6个月,避免反复冻融;10×SUMO Buffer置于-20°C保存即可。 | ||
实例 | ||
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Fig: 分别用2μl和5μl的SUMO蛋白酶(C0801)对100 μg SUMO酶切对照融合蛋白(C0801P)进行酶切1h或3h,如图所示。M:Protein Marker,泳道1:纯化后的SUMO-A蛋白; 泳道2:2μl SUMO Protease 酶切1h产物;泳道3:5μl SUMO Protease 酶切1h产物; 泳道4:2μl SUMO Protease 酶切3h产物;泳道5:5μl SUMO Protease 酶切3h产物。 |