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产品描述: 产品名称:全血基因组DNA快速提取试剂盒 描述: 独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
使用方法: 提示: 第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇,充分混匀, 加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 操作: 1、处理血液材料(本产品适用于处理已添加抗凝剂的 100μl-1ml 血液样品); a、当血液样品体积小于 200μl 时,可加缓冲液 BB 补足至 200μl,再进行下一步实 验(如血液样品体积为 200μl,可直接进行下一步实验,不需加入 BB) b、当血液样品体积超过 200μl 时,需用裂解液 RBC 处理,具体步骤如下: 在样品中加入 1-3 倍体积的裂解液 RBC,颠倒混匀,室温放置 10min,1,2000rpm 离心 20sec,吸去上清,留下细胞核沉淀(如果裂解不彻底,可以重复以上步 骤一次),向离心收集到的细胞核沉淀中加 200μl 缓冲液 BB,振荡至彻底混匀。 c、如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类活更低级生物的抗凝血液,其红细胞为 有核细胞,因此处理量 5-20μl,可加缓冲液 BB 补足 200μl 后进行下面裂解步 骤。 注意:如果需要去除 RNA,可加入 4μl RNaseA(10mg/ml)溶液,振荡 15sec, 室温放置 5min。 2、加入 20μl 蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,充分混匀,再加入 200μl 结合液 CB,立刻 涡旋振荡充分混匀,在 70℃放置 10min,直到溶液变清亮。 3、冷却后加入 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。 4、将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入 收集管中)12,000 rpm 离心 30-60sec,倒掉收集管中的废液。 5、加入 500μl 抑制物去除液 IR, 12,000 rpm 离心 30sec,弃废液。 6、加入 500μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!), 12,000 rpm 离心 30sec, 弃掉废液。 7、重复操作步骤 6。 8、将吸附柱 AC 放回空收集管中, 12,000 rpm 离心 2min,将吸附柱置于室温放置 数数分钟, 以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑 制下游反应。 9、取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 60-100μl 洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好),室温放 置 2min,12,000 rpm 离心 2min。为增加基因组 DNA 的得率,可将离心得 到的溶液再加入吸附柱 AC 中,室温放置 2 min,12,000 rpm 离心 2 min。 (注意:若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存 在-20℃,以防 DNA 降解) 储存/保存方法: 室温保存,有效期12个月。RNaseA建议-20℃长期保存。 注意事项: 1、结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水 浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
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