产品详情
HA抗体亲和凝胶
中文名称: HA抗体亲和凝胶
英文名称: Anti-HA Affinity gel
相关类别: 抗体相关支持试剂
储 存: 冷藏(2-8℃) 不可冻存
概述
HA抗体亲和凝胶是以小鼠抗HA单克隆抗体和高交联度的琼脂糖凝胶结合而成,杂蛋白非特异性结合少,可用于HA标签融合蛋白的纯化和免疫沉淀。
特点
φ45-165 μm,1ml凝胶最少可结合1mg HA标签蛋白
应用
纯化,免疫沉淀
使用说明
1. 纯化 1.1 填料准备:取适量的凝胶加入层析柱中,流干保存液,加入5倍柱体积(凝胶体积)的平衡液清洗。 1.2 加入样品溶液,室温震荡孵育30分钟(不能用磁力搅拌器搅拌),确保填料与样品溶液充分混合。 1.3 孵育完毕后,将填料混合液离心:1000g,5分钟,或过滤收集填料。 1.4 将填料装入层析柱中,用平衡液清洗4-5次,直至紫外检测值稳定。 1.5 洗脱 1.5.1 酸性洗脱:加入5倍柱体积的酸性洗脱液,收集管中预先加好中和液50 μl中和液/ml洗脱液,分管收集。 注意:酸性洗脱后填料要立即用平衡液平衡,Anti-HA Affinity gel在洗脱液中不要超过20分钟。 1.5.2 竞争性洗脱:使用5倍柱体积的竞争性洗脱液HA多肽0.5 mg/ml洗脱,30℃孵育10-15分钟,重复1-2次,分管收集。 1.6 使用3倍柱体积的酸性洗脱液再生凝胶,然后用平衡液平衡至中性。 1.7 加入保存液,2-8℃保存。 2. 免疫沉淀 2.1 取20-100μl的Anti-HA Affinity gel加入到2ml 离心管中,离心:5000g,30秒,弃去上清。 2.2 加入0.5ml平衡液,悬浮填料,离心:5000g,30秒,弃去上清。重复一次。 2.3 加入200-1000μl样品裂解液,与填料混合均匀,置于旋转混合仪上轻轻旋转离心管,使样品和填料充分接触并吸附,室温1小时。混匀后离心:5000g,30秒,吸取上清,留样检测。 2.4 洗涤:加入0.5ml的洗涤液,悬浮填料,进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,离心:5000g,30秒,弃去上清。重复3次。 2.5 变性洗脱:加入5μl 5X变性洗脱液,沸水浴煮沸5分钟。离心:5000g,30秒,吸取上清进行SDS-PAGE电泳检测。 注意:变性洗脱液中含有SDS,会使偶联的HA抗体变性,洗脱后的凝胶不可重复使用。 |