产品详情
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试剂描述:
产品名称:DiI perchlorate
产品别名:细胞膜荧光探针DiI, DiI细胞膜染料, 1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate; 3H-Indolium; 2-(3-(1,3-dihydro-3,3-dimethyl-1-octadecyl-2H-indol- 2-ylidene)-1-propenyl)-3,3-dimethyl-1-octadecyl-, perchlorate
CAS号:41085-99-8
英文别名:DiI perchlorate
分子量:933.87
分子式:C59H97ClN2O4
纯度:≥95%
外观:见爱必信官网
保存方法:?20°C干燥避光保存,产品有效期为12个月
描述:
DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色,这类染料在整个细胞膜上扩散,最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显:DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发,有着比DiI更长的激发波长和发射波长,在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。
应用:细胞膜荧光染料、神经元顺行和逆行示踪、细胞长期示踪
使用方法:
1. 染色液制备
(1)配置DMSO 或 EtOH 储存液:储存液用 DMSO 或 EtOH 配置浓度 1~5 mM。 注:未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融。
(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS 或 PBS)稀释储存液,配制浓度为 1~5μM 的工作液。 注:工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。 建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始最优浓度的摸索。
2. 悬浮细胞染色
(1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为 1×10 6 /mL。
(2)37℃ 孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间 不同。可以20 min 作为起始孵育时间,之后优化体系以得 到均一的标记结果。
(3)孵育结束,1000~1500 rpm离心5 min。倾倒上清液, 再次缓慢加入37 ℃预热的生长培养液重悬细胞。
(4)重复步骤(3)两次以上。
3. 贴壁细胞的染色
(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,但表面要 保持湿润。
(3)在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液,轻轻晃动 使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)37℃ 孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片 2~3 次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10 min,然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。
注意事项:1. DiI 染色固定的细胞或组织样品时,样品宜使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液 会导致荧光背景较高。 2. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧 光淬灭。 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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