产品详情
MSU440 Electro电转感受态细胞
MSU440 Electroporation-Competent Cell
MSU440 Electro电转感受态细胞产品规格(CAT#:ZY1070)
MSU440 Electro: 50μl/支
pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl ): 10μl
保存条件(保质期): -80℃(12个月)
基因型
Agrobacterium rhizogenes(strR ) MSU440 Ri (agropine type)
MSU440 Electro电转感受态细胞产品说明
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。MSU440发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,茶树,青蒿等),同时具有链霉素抗性。泽叶生物开发的 MSU440发根农杆菌电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pCAMBIA2301质粒 (size:11633 bp)检测转化效率>105 cfu/μgDNA;经pCAMBIA2301-ZH质粒(size:40 kd)检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。
MSU440 Electro电转感受态细胞操作方法
1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入0.01-1 μg质粒DNA(体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解;转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。
3. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯从冰中拿出,吸水纸吸干外表面水份,快速放入电转槽中,启动电击,电击完成快速插入冰中,加入1 ml无抗生素的TY,并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的平板上,倒置放于28℃培养箱培养72小时
MSU440 Electro电转感受态细胞意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧
下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
2. 电转感受态细胞中不可混入气泡,转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,
应减少质粒用量或最终用于涂板的菌量。
4. MSU440具有链霉素抗性,不可用于具有链霉素抗性质粒的转化。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!