产品详情
3D4/21(猪肺泡巨噬细胞)的培养操作步骤!
一、细胞简介
平台编号:bio-105900
规格:1ml/T75
拉丁属名:3D4/21
产品名称:3D4/21(猪肺泡巨噬细胞)
型号:HTX2097
生长特性:贴壁
组织来源:猪肺泡巨噬细胞
培养基:89%DMEM+10%FBS+1%双抗
培养温度:37℃
种属:其它细胞系/仓鼠、猴、猪、狗、鸡、鸭等
到货周期:10-15个工作日
二、3D4/21(猪肺泡巨噬细胞)介绍
母细胞3D4来源于pSV3neo质粒转染猪原代肺泡巨噬细胞得到的。该克隆通过G418筛选得到。
三、3D4/21(猪肺泡巨噬细胞)特性
1)来源:猪肺
2)形态:巨噬细胞样,贴壁生长
3)含量:>1x10e6 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
四、3D4/21(猪肺泡巨噬细胞)接受后的处理
1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。
4)如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
五、细胞用途:仅供科研使用。
本公司的细胞培养操作规程,供参考
一、培养基及培养冻存条件准备
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640,GIBCO,货号11875085),90%;添加0.1mM NEAA, 1mM丙酮酸钠;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
3、轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。
4、移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行,最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X10e6个细胞冻存。
三、注意事项
1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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