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上海钦胜生物科技有限公司
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产品详情

 

细胞名称:BCECs鼠脑毛细血管内皮细胞 

组织来源:脑;毛细血管;内皮细胞 

培养条件:1640 +10% FBS;37℃,5% CO2
生长状态:贴壁


BCECs鼠脑毛细血管内皮细胞培养步骤

一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备培养基;北美胎牛血清,10%;双抗1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。 

二、使用方法

1收到细胞后,请按照以下方法进行操作

取出T-25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入375%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜,以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,PBS清洗细胞一次;

2添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1500rpm/min,离心5min

3弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬然后1:2比例进行分瓶传代,放入375%CO2胞培养箱中培养

4待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代

3、细胞冻存:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,PBS清洗细胞一次;

2添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落,再加入完全培养液终止消化,然后将悬液转移至15ml离心管中,1500rpm/min,离心5min

3用适当量的冻存液(基础培养基:FBSDMSO=7:2:1)重悬细胞,并放置于冻存管中;

4先将细胞冻存管放置于-201.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。

4、细胞复苏:

1从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具) 快速将其置入37水浴中解冻,直至冻存管中结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中,滴加入完全培养液5ml混匀细胞,然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中;

3置于375%CO2细胞培养箱中培养;

4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。

三、注意事项

1培养基4条件下可保存3-6个月

2、在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作

3、该细胞只可用于科研;